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木虫 (小有名气)

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[交流] qpcr实验复孔后的问题已有8人参与

做细胞水平的验证时，发生了很诡异的结果，就是我的目的基因都P出来，并且重现性和复孔之间的差距都很小，但是内参基因GAPDH确很不稳定，复孔之间会差5个以上的Ct值，我做了8次了，每次都不一样，而且差距都很大，复孔之间始终存在很大的差异，以前做组织时都没有这种现象，但是GAPDH的溶解曲线峰值很好，都是83.5,而且没有杂峰。我为了防止可能是自己操作的误差，把所有Mix和模板，引物都加在一个管子里混匀了，在分到不同的PCR管中，可是复孔之间还是差距很大。我做了4个复孔，有3个复孔的Ct12，有1个复孔是4。跑胶的结果是12和4的复孔的亮度没什么区别，你觉得可能是什么原因呢？

组织和细胞水平一起做的时候，组织中的GAPDH都很正常，复孔之间没有什么差距，就是细胞特别不稳定。

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