24小时热门版块排行榜    

查看: 1732  |  回复: 7
当前主题已经存档。

董文娟

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】KpnI 、 NcoI 双酶切(基本解决,谢谢大家)

请问有有没有做过KpnI 、 NcoI 双酶切的
这两酶酶切要注意什么问题? 酶切效果如何?
谢谢

[ Last edited by 董文娟 on 2008-9-12 at 08:38 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyjzx2008

金虫 (小有名气)

建议使用0.5xK+BSA为反应缓冲液,先用小体系摸实验条件,然后再换用大体系反应。不过还要考虑你买的那个厂家的酶,参照说明书。宝生物公司的产品说明比较全面,请仔细阅读,希望对你有所帮助。
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-1FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-2FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-3FH11001.html
2楼2008-09-08 13:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenlong8628

这两种酶的最适buffer并不一样,所以像上面虫友说的选BSA为缓冲液也可以,或者是做两次但酶切(先做一种酶切,然后热灭活之后再做另外一酶切)。这样的话估计会切开的。
3楼2008-09-08 14:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董文娟

金虫 (小有名气)

谢谢
我看了上海生工(即宝生物)的资料 在K缓冲液中,KpnI 活性很低,是不是要适当延长作用时间?
4楼2008-09-08 21:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者

我做双酶切都是同时切。缓冲液选其中一种。再加BSA。
不过一般手册上是推荐是:双酶切先反应低盐度buffer。后反应高盐度buffer
5楼2008-09-08 22:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

强烈建议分步酶切,如果质粒切不完全做出来单切,假阳性超多
6楼2008-09-09 09:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

可以切 如果用Promega 双酶切 效率达到75%-100%
7楼2008-09-09 10:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangshengyan

木虫 (正式写手)

分步酶切吧
ANNA&KEVIN
8楼2008-09-10 05:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 董文娟 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 9/450 2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 0703化学调剂 +4 pupcoco 2026-03-17 7/350 2026-03-18 12:14 by djl2006
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见