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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】KpnI 、 NcoI 双酶切(基本解决，谢谢大家）
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董文娟

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】KpnI 、 NcoI 双酶切(基本解决，谢谢大家）

请问有有没有做过KpnI 、 NcoI 双酶切的
这两酶酶切要注意什么问题？ 酶切效果如何？
谢谢

[ Last edited by 董文娟 on 2008-9-12 at 08:38 ]
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1楼 2008-09-08 12:30:23
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xipha

木虫 (正式写手)
强烈建议分步酶切，如果质粒切不完全做出来单切，假阳性超多
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6楼2008-09-09 09:19:30
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renyjzx2008

金虫 (小有名气)
建议使用0.5xK+BSA为反应缓冲液，先用小体系摸实验条件，然后再换用大体系反应。不过还要考虑你买的那个厂家的酶，参照说明书。宝生物公司的产品说明比较全面，请仔细阅读，希望对你有所帮助。
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-1FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-2FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-3FH11001.html
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2楼2008-09-08 13:12:57
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chenlong8628

这两种酶的最适buffer并不一样，所以像上面虫友说的选BSA为缓冲液也可以，或者是做两次但酶切（先做一种酶切，然后热灭活之后再做另外一酶切）。这样的话估计会切开的。
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3楼2008-09-08 14:10:51
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董文娟

金虫 (小有名气)
谢谢
我看了上海生工（即宝生物）的资料 在K缓冲液中，KpnI 活性很低，是不是要适当延长作用时间？
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4楼2008-09-08 21:56:14
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