24小时热门版块排行榜    

查看: 1736  |  回复: 7
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

董文娟

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】KpnI 、 NcoI 双酶切(基本解决,谢谢大家)

请问有有没有做过KpnI 、 NcoI 双酶切的
这两酶酶切要注意什么问题? 酶切效果如何?
谢谢

[ Last edited by 董文娟 on 2008-9-12 at 08:38 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

强烈建议分步酶切,如果质粒切不完全做出来单切,假阳性超多
6楼2008-09-09 09:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

renyjzx2008

金虫 (小有名气)

建议使用0.5xK+BSA为反应缓冲液,先用小体系摸实验条件,然后再换用大体系反应。不过还要考虑你买的那个厂家的酶,参照说明书。宝生物公司的产品说明比较全面,请仔细阅读,希望对你有所帮助。
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-1FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-2FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-3FH11001.html
2楼2008-09-08 13:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenlong8628

这两种酶的最适buffer并不一样,所以像上面虫友说的选BSA为缓冲液也可以,或者是做两次但酶切(先做一种酶切,然后热灭活之后再做另外一酶切)。这样的话估计会切开的。
3楼2008-09-08 14:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董文娟

金虫 (小有名气)

谢谢
我看了上海生工(即宝生物)的资料 在K缓冲液中,KpnI 活性很低,是不是要适当延长作用时间?
4楼2008-09-08 21:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +5 吃吃吃才有意义 2026-03-19 5/250 2026-03-19 16:18 by 30660438
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分,有科研经历,求调剂 +3 一瓶苯甲酸 2026-03-14 3/150 2026-03-19 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +11 陌の森林 2026-03-18 11/550 2026-03-19 13:22 by houyaoxu
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
信息提示
请填处理意见