应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】KpnI 、 NcoI 双酶切(基本解决，谢谢大家）
81/1返回列表
查看: 1726  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

董文娟

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】KpnI 、 NcoI 双酶切(基本解决，谢谢大家）

请问有有没有做过KpnI 、 NcoI 双酶切的
这两酶酶切要注意什么问题？ 酶切效果如何？
谢谢

[ Last edited by 董文娟 on 2008-9-12 at 08:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-09-08 12:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyjzx2008

金虫 (小有名气)
建议使用0.5xK+BSA为反应缓冲液，先用小体系摸实验条件，然后再换用大体系反应。不过还要考虑你买的那个厂家的酶，参照说明书。宝生物公司的产品说明比较全面，请仔细阅读，希望对你有所帮助。
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-1FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-2FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-3FH11001.html
赞一下 回复此楼
2楼2008-09-08 13:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenlong8628

这两种酶的最适buffer并不一样，所以像上面虫友说的选BSA为缓冲液也可以，或者是做两次但酶切（先做一种酶切，然后热灭活之后再做另外一酶切）。这样的话估计会切开的。
赞一下 回复此楼
3楼2008-09-08 14:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董文娟

金虫 (小有名气)
谢谢
我看了上海生工（即宝生物）的资料 在K缓冲液中，KpnI 活性很低，是不是要适当延长作用时间？
赞一下 回复此楼
4楼2008-09-08 21:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
我做双酶切都是同时切。缓冲液选其中一种。再加BSA。
不过一般手册上是推荐是：双酶切先反应低盐度buffer。后反应高盐度buffer
赞一下 回复此楼
5楼2008-09-08 22:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
强烈建议分步酶切，如果质粒切不完全做出来单切，假阳性超多
赞一下 回复此楼
6楼2008-09-09 09:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
可以切 如果用Promega 双酶切 效率达到75％-100％
赞一下 回复此楼
7楼2008-09-09 10:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangshengyan

木虫 (正式写手)
分步酶切吧
回复此楼
ANNA&KEVIN
8楼2008-09-10 05:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 董文娟 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂（0805） +7 烟汐忆海 2026-03-16 17/850 2026-03-19 09:55 by 30660438
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 10/500 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭