24小时热门版块排行榜    

查看: 1734  |  回复: 7
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

董文娟

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】KpnI 、 NcoI 双酶切(基本解决,谢谢大家)

请问有有没有做过KpnI 、 NcoI 双酶切的
这两酶酶切要注意什么问题? 酶切效果如何?
谢谢

[ Last edited by 董文娟 on 2008-9-12 at 08:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者

我做双酶切都是同时切。缓冲液选其中一种。再加BSA。
不过一般手册上是推荐是:双酶切先反应低盐度buffer。后反应高盐度buffer
5楼2008-09-08 22:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

renyjzx2008

金虫 (小有名气)

建议使用0.5xK+BSA为反应缓冲液,先用小体系摸实验条件,然后再换用大体系反应。不过还要考虑你买的那个厂家的酶,参照说明书。宝生物公司的产品说明比较全面,请仔细阅读,希望对你有所帮助。
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-1FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-2FH11001.html
http://www.takara.com.cn/product/2007/a/A-3FH11001.html
2楼2008-09-08 13:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenlong8628

这两种酶的最适buffer并不一样,所以像上面虫友说的选BSA为缓冲液也可以,或者是做两次但酶切(先做一种酶切,然后热灭活之后再做另外一酶切)。这样的话估计会切开的。
3楼2008-09-08 14:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董文娟

金虫 (小有名气)

谢谢
我看了上海生工(即宝生物)的资料 在K缓冲液中,KpnI 活性很低,是不是要适当延长作用时间?
4楼2008-09-08 21:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +11 陌の森林 2026-03-18 11/550 2026-03-19 13:22 by houyaoxu
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
信息提示
请填处理意见