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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条带不正确，求大神赐教！
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)

[求助] PCR条带不正确，求大神赐教！ 已有6人参与

晚辈验证过模板没问题，之前也曾p出来过正确的条带，但最近p出来的条带都变小了，体系及程序都一样，引物虽然新合成了，但序列应该和之前的一样，不知道什么原因，请大神赐教。。。。
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1楼 2015-10-20 22:35:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
99蜗牛99: 金币+2 2015-10-22 09:07:00
1.作对照阴性对照，不加模板。
2.换一管pcr酶，取引物储存液重新稀释。
3.换个人做
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2楼2015-10-20 23:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reddogs

金虫 (正式写手)

东海客

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
99蜗牛99: 金币+1 2015-10-22 09:07:30
这个简单，把P出来的带扣下来回收，送去测个序，看是啥东东
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whereisawill,thereisaway
4楼2015-10-21 23:38:57
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
99蜗牛99: 金币+2 2015-10-22 19:08:25
有可能是你的胶板有问题，或者该换电泳液了，不出意外就这两个问题，楼主试一下，祝好运

发自小木虫Android客户端
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我要让你的生活因为有我而更精彩
8楼2015-10-22 11:59:24
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普通回帖

tolobio

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:09:11
本帖内容被屏蔽
3楼2015-10-21 08:14:22
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-21 08:14:22
保存了一段时间，模板可能有变。建议，重新制备模板。有条件的话，做个温度梯度PCR。
如果做克隆的话，可以送到我们公司，仅供参考：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110

模板经酶切验证了，大小也合适，但稀释不同浓度的模板pcr出现了不同的非特异性条带。。。
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5楼2015-10-22 09:11:48
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 赵鑫易 at 2015-10-20 23:42:17
1.作对照阴性对照，不加模板。
2.换一管pcr酶，取引物储存液重新稀释。
3.换个人做

引物浓度也会影响pcr特异性吗
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6楼2015-10-22 09:12:43
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ray540213374

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
来些p出来正确跟不正确的图看看啊，实在不行就测序看看是那个序列
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7楼2015-10-22 10:06:14
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序验证下，是自己要的吗，不然重新设计引物
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9楼2015-10-22 14:24:05
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
估计是退火温度不合适吧，试试提高温度看看。
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生物科学
10楼2015-10-22 15:32:00
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