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99蜗牛99

新虫 (小有名气)

[求助] PCR条带不正确,求大神赐教! 已有6人参与

晚辈验证过模板没问题,之前也曾p出来过正确的条带,但最近p出来的条带都变小了,体系及程序都一样,引物虽然新合成了,但序列应该和之前的一样,不知道什么原因,请大神赐教。。。。
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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99蜗牛99: 金币+2 2015-10-22 09:07:00
1.作对照阴性对照,不加模板。
2.换一管pcr酶,取引物储存液重新稀释。
3.换个人做
2楼2015-10-20 23:42:17
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reddogs

金虫 (正式写手)

东海客

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
99蜗牛99: 金币+1 2015-10-22 09:07:30
这个简单,把P出来的带扣下来回收,送去测个序,看是啥东东
whereisawill,thereisaway
4楼2015-10-21 23:38:57
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
99蜗牛99: 金币+2 2015-10-22 19:08:25
有可能是你的胶板有问题,或者该换电泳液了,不出意外就这两个问题,楼主试一下,祝好运

发自小木虫Android客户端
我要让你的生活因为有我而更精彩
8楼2015-10-22 11:59:24
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普通回帖

tolobio

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:09:11
本帖内容被屏蔽

3楼2015-10-21 08:14:22
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-21 08:14:22
保存了一段时间,模板可能有变。建议,重新制备模板。有条件的话,做个温度梯度PCR。
如果做克隆的话,可以送到我们公司,仅供参考:http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110

模板经酶切验证了,大小也合适,但稀释不同浓度的模板pcr出现了不同的非特异性条带。。。
5楼2015-10-22 09:11:48
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99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 赵鑫易 at 2015-10-20 23:42:17
1.作对照阴性对照,不加模板。
2.换一管pcr酶,取引物储存液重新稀释。
3.换个人做

引物浓度也会影响pcr特异性吗
6楼2015-10-22 09:12:43
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ray540213374

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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来些p出来正确跟不正确的图看看啊,实在不行就测序看看是那个序列
7楼2015-10-22 10:06:14
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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测序验证下,是自己要的吗,不然重新设计引物
9楼2015-10-22 14:24:05
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
估计是退火温度不合适吧,试试提高温度看看。
生物科学
10楼2015-10-22 15:32:00
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