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DJunsheep

新虫 (初入文坛)

[求助] HEK293T 培养时底部有黑色小颗粒(不浮走,洗不掉) 转染后第2天 已有3人参与

我刚接触细胞培养不久,养过2个月大鼠小鼠的造骨细胞(比HEK脆弱得多),没试过污染的。

前不久开始做HEK293T,养的时候发现细胞的缝隙会有黑色小点,贴底不浮,PBS洗不掉。

HEK293T 培养时底部有黑色小颗粒(不浮走,洗不掉) 转染后第2天

HEK293T 培养时底部有黑色小颗粒(不浮走,洗不掉) 转染后第2天-1

HEK293T 培养时底部有黑色小颗粒(不浮走,洗不掉) 转染后第2天-2

如果只是传代的话好像没有影响,做转染也还好,但转染第2天或者种的时候就会死一大片(种不下去、形状改变、浮起等),有时候可以从新坐下去贴壁但不是星星状而是有点肥圆(贴底不浮),有时候从转染第二天开始颜色会改变。

浮起的样子:
HEK293T 培养时底部有黑色小颗粒(不浮走,洗不掉) 转染后第2天-3

试过培养基(DMEM)正常,其他正在试,看有没有染菌的。
但一般染菌的话细胞传代的时候应该有影响,所以想问问有没有哪位知道除了污染还有什么可能出现黑点以及引起细胞死亡的?
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renshaofang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也试过这个情况,我养的是癌细胞,养着养着就成这样了,但是我觉得不是支原体污染导致的,我养好多种癌细胞,用的是同一个培养液,但是有这情况的只是其中一个细胞,所以我觉得与血清&培养液无关。我觉得应该是状态不好导致的。
4楼2016-01-20 20:16:54
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ahushun

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也出现过这种情况,先怀疑是支原体感染,但是加了支原体抗生素后依然不见好转。后来怀疑是血清问题,换了好几种,最后是用Gibco的最贵的血清后就变好了,不知道你的血清来源哪里,你可以换一点试试看
天行健,君子有自强不息;地势坤,君子以厚德载物;
2楼2015-10-20 07:52:07
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jora0418

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我的细胞也是这样,不做转染还好一做转染就不容易贴壁。确定不是支原体污染么?因为我最近在试支原体清除剂去去除这些小黑点。
3楼2015-11-14 16:13:03
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