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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请问怎么研究一个管家蛋白的修饰对这个蛋白与另外一个蛋白相互作用的影响
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yjliu1127

银虫 (小有名气)

[求助] 请问怎么研究一个管家蛋白的修饰对这个蛋白与另外一个蛋白相互作用的影响 已有1人参与

某个修饰比如磷酸化修饰对蛋白很重要，我想研究这个修饰对这个蛋白与另外一个蛋白相互作用的影响，如果抑制这个修饰（如磷酸化修饰或其他修饰）就会使蛋白失活，细胞（HEK293T）就不长，因为这个蛋白是和细胞增殖相关的。本来想直接往细胞培养液中加入磷酸化抑制剂，或其它修饰的抑制剂，现在觉得行不通，不知道大家有没有什么好的建议,非常感谢！
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nO
1楼 2014-05-03 11:29:15
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yjliu1127(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-03 20:26:53
用酵母三杂交方式证明，也可在体外pull down证明，引入激酶进行磷酸化修饰

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2楼2014-05-03 12:18:47
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yjliu1127

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-03 12:18:47
用酵母三杂交方式证明，也可在体外pull down证明，引入激酶进行磷酸化修饰

非常感谢您的回复！如果这个修饰是多个酶负责完成的，请问用酵母三杂交怎么设计实验？如果在体外做pull down, 从HEK293T细胞提取的蛋白本身就已经修饰的，怎样才可以提取没有修饰的蛋白。如果用E.coli表达没有修饰的真核蛋白，不一定能用呀。不知道怎么办了？
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nO
3楼2014-05-03 13:05:37
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