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PCR引物的设计 已有1人参与
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我以myc-his-pcDNA3.1（B）为载体，插入目的基因，选择HindⅢ和XbaI 作为酶切位点，位点XbaI 考虑了移码突变，并补上了两个碱基。PCR，酶切，连接之后，双酶切验证和测序结果都是对的。后用western blot 检验相应的蛋白表达，发现目的基因表达，但是标签蛋白检测不到。请各位大神指点，我是不是开始的时候引物就设计错了？据说，XbaI自带终止密码子，但是分析了，它自带的TAG是分散在不同的密码子中的。以下是我的引物设计： Myc-PINK1 Primer F: 5'-GGCGGC AAGCTTAT GGCGGTGCGACAGGCGCTG Myc-PINK1 Primer R: 5'-GGCGGC TCTAGA CT CAGGGCTGCCCTCCATGAGC |
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西门吹雪170: 屏蔽内容, 禁止发布商业性回帖 2015-10-20 21:08:23
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本帖内容被屏蔽 |
2楼2015-10-19 12:40:44
hanxiaominhu
至尊木虫 (著名写手)
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3楼2015-10-20 07:55:40
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目的基因完整序列，共有1746个碱基：atggcg gtgcgacagg cgctgggccg 121 cggcctgcag ctgggtcgag cgctgctgct gcgcttcacg ggcaagcccg gccgggccta 181 cggcttgggg cggccgggcc cggcggcggg ctgtgtccgc ggggagcgtc caggctgggc 241 cgcaggaccg ggcgcggagc ctcgcagggt cgggctcggg ctccctaacc gtctccgctt 301 cttccgccag tcggtggccg ggctggcggc gcggttgcag cggcagttcg tggtgcgggc 361 ctggggctgc gcgggccctt gcggccgggc agtctttctg gccttcgggc tagggctggg 421 cctcatcgag gaaaaacagg cggagagccg gcgggcggtc tcggcctgtc aggagatcca 481 ggcaattttt acccagaaaa gcaagccggg gcctgacccg ttggacacga gacgcttgca 541 gggctttcgg ctggaggagt atctgatagg gcagtccatt ggtaagggct gcagtgctgc 601 tgtgtatgaa gccaccatgc ctacattgcc ccagaacctg gaggtgacaa agagcaccgg 661 gttgcttcca gggagaggcc caggtaccag tgcaccagga gaagggcagg agcgagctcc 721 gggggcccct gccttcccct tggccatcaa gatgatgtgg aacatctcgg caggttcctc 781 cagcgaagcc atcttgaaca caatgagcca ggagctggtc ccagcgagcc gagtggcctt 841 ggctggggag tatggagcag tcacttacag aaaatccaag agaggtccca agcaactagc 901 ccctcacccc aacatcatcc gggttctccg cgccttcacc tcttccgtgc cgctgctgcc 961 aggggccctg gtcgactacc ctgatgtgct gccctcacgc ctccaccctg aaggcctggg 1021 ccatggccgg acgctgttcc tcgttatgaa gaactatccc tgtaccctgc gccagtacct 1081 ttgtgtgaac acacccagcc cccgcctcgc cgccatgatg ctgctgcagc tgctggaagg 1141 cgtggaccat ctggttcaac agggcatcgc gcacagagac ctgaaatccg acaacatcct 1201 tgtggagctg gacccagacg gctgcccctg gctggtgatc gcagattttg gctgctgcct 1261 ggctgatgag agcatcggcc tgcagttgcc cttcagcagc tggtacgtgg atcggggcgg 1321 aaacggctgt ctgatggccc cagaggtgtc cacggcccgt cctggcccca gggcagtgat 1381 tgactacagc aaggctgatg cctgggcagt gggagccatc gcctatgaaa tcttcgggct 1441 tgtcaatccc ttctacggcc agggcaaggc ccaccttgaa agccgcagct accaagaggc 1501 tcagctacct gcactgcccg agtcagtgcc tccagacgtg agacagttgg tgagggcact 1561 gctccagcga gaggccagca agagaccatc tgcccgagta gccgcaaatg tgcttcatct 1621 aagcctctgg ggtgaacata ttctagccct gaagaatctg aagttagaca agatggttgg 1681 ctggctcctc caacaatcgg ccgccacttt gttggccaac aggctcacag agaagtgttg 1741 tgtggaaaca aaaatgaaga tgctctttct ggctaacctg gagtgtgaaa cgctctgcca 1801 ggcagccctc ctcctctgct catggagggc agccctgtga |
4楼2015-10-20 15:47:02
5楼2015-10-20 15:55:15
6楼2015-10-20 16:02:18
hanxiaominhu
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7楼2015-10-20 16:57:50
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nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:09:45
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:09:45
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8楼2015-10-20 19:55:38
9楼2015-10-22 13:10:38