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基因组总DNA 电泳,这些尾带是降解的吗?
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runye2015
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基因组总DNA 电泳,这些尾带是降解的吗?
已有6人参与
如题
1、两三个月前提取的基因组总DNA ,一直在零下80度冰箱保存
2、左1为12500 的MARKER,左2-3两样本是为3个月前提取的,4-5两样本是为2个月前提取
3、0.8%的琼脂糖,90V 5分钟,然后170V 25分钟
4、麻烦大家看下,我的DNA 有没有降解,尾带很亮,如果后续做PCR-DGGE还有荧光定量PCR还有会不会有影响?
谢谢大家啦!
基因组总DNA 琼脂糖凝胶电泳
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1楼
2015-10-17 14:09:41
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王平阳
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2015-10-18 09:46:21
引用回帖:
2楼
:
Originally posted by
秉秉的法兰西
at 2015-10-17 17:32:48
可能是引物特异性不高。或者引物时间长了
人家是直接基因组DNA电泳,没有做PCR,哪来的引物啊,麻烦回答问题前把问题看清楚先?
言归正传,提取总DNA,不可避免会带入RNA的,所以有可能是RNA,不过也有可能是DNA降解所致,我的经验是提取的DNA只要没有重大失误还是可以用的,做PCR的时候稀释一下,稀释到10到100 ng/uL使用效果会比较好,祝你好运!
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没有做不到,只有想不到!
3楼
2015-10-17 20:28:14
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秉秉的法兰西
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runye2015: 金币+1
2015-10-17 22:52:22
可能是引物特异性不高。或者引物时间长了
发自小木虫IOS客户端
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2楼
2015-10-17 17:32:48
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jianguochen
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runye2015: 金币+4
2015-10-18 09:52:44
一般DNA降解弥散的话,跟你这个图不同,有可能跟楼上说的一样,有RNA污染,而且还降解了,光看你的胶图的话,看得出纯度是有问题的,胶孔里有亮带,应该是有蛋白残留,你是用什么方法提取的呢,有用分光光度计测下么,可以用RNase消化,然后纯化下。免得Qpcr时RNA引入非特异产物。
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4楼
2015-10-17 21:40:04
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runye2015
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2楼
:
Originally posted by
秉秉的法兰西
at 2015-10-17 17:32:48
可能是引物特异性不高。或者引物时间长了
还是非常感谢您的回答!hand~
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5楼
2015-10-17 22:52:11
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