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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接产物转化后无阳性！求原因
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Gaory0906

新虫 (小有名气)

[求助] 连接产物转化后无阳性！求原因 已有3人参与

请大神指教一下我的问题。我的载体4微升转化，长出来两个菌落。我的连接产物（配连接体系时加入4微升的载体），转化后长出20个菌落。我觉得单纯转化载体是对照，连接产物长出这么多菌落肯定说明连接成功啊。结果，我做菌液pcr ，没有条带唉。。。。怎么回事，请大神指教！！
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搞死科研
1楼 2015-10-17 06:13:42
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jianguochen

新虫 (小有名气)
用这个阳参判断实验有点勉强，加入4ul线性载体的连接体系做转化比4ul的环状质粒转化效率高10倍，这个结果本身与预期是有冲突的，所以以此判断转化成功与否有待商榷。如果确实对转化结果有信心，可以将阳性提质粒，再用于PCR，或许是菌体或者质粒拷贝数比较低呢。
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6楼2015-10-17 22:22:08
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-17 18:04:26
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2楼2015-10-17 06:51:37
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Gaory0906

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 弦山小栗 at 2015-10-17 06:51:37
要是确定没有问题，提个质粒做酶切试试，有时菌液pcr不一定准确，我们实验室是100ul感受态加10ul连接产物，涂板时是涂50ul就能长挺多菌的。感受态是dh5a,质粒是t载体。希望对你有帮助。
...

您感觉菌液PCR不一定准确？那拿质粒pcr是不是会好些？
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搞死科研
3楼2015-10-17 08:52:40
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wxb2061

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 弦山小栗 at 2015-10-17 06:51:37
要是确定没有问题，提个质粒做酶切试试，有时菌液pcr不一定准确，我们实验室是100ul感受态加10ul连接产物，涂板时是涂50ul就能长挺多菌的。感受态是dh5a,质粒是t载体。希望对你有帮助。
...

100ul?为什么这么多，我们是50ul，难道量多会更好吗

发自小木虫Android客户端
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走在途中……
4楼2015-10-17 10:12:30
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