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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请大家看一下这张电泳图
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runye2015

新虫 (小有名气)

[交流] 请大家看一下这张电泳图

新手求教！
1、用16SrDNA通用引物，细菌基因组总DNA为模板，
2、普通PCR 50微升体系、模板2微升，引物上下游各1微升， 退火温度56°C（看到文献，没有做温度梯度）
3、电压 110V   时间40分钟
2、引物序列：
16SrDNA 338F:CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGG CCTACGGGAGGCAGCAG
              518R:ATTACCGCGGCTGCTCC
3、左一MARKER跑的很清楚 500-25BP 依次是 500 400 300 200 150 100 75 50 25
4、条带最上方有可能是加样的时候飘出来造成的，做出来没有看到目的条带，求大神讲解！

请大家看一下这张电泳图
电泳图.jpg
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1楼 2015-10-15 21:18:56
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肥猫p

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
runye2015: 金币+2 2015-10-15 23:00:03
你这两条引物差别真大。
你扩这么短，是想下一步做real time测拷贝数吗？
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2楼2015-10-15 21:38:10
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runye2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肥猫p at 2015-10-15 21:38:10
你这两条引物差别真大。
你扩这么短，是想下一步做real time测拷贝数吗？

不是的，上游引物加了个GC夹，打算做变形梯度凝胶电泳

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3楼2015-10-15 22:59:51
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马小瓜

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
runye2015: 金币+3 2015-10-16 13:58:33
是不是总DNA有问题？总DNA有跑过电泳吗？条带清晰吗？什么时候提取的？是—80保存吗？

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4楼2015-10-15 23:10:21
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runye2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 马小瓜 at 2015-10-15 23:10:21
是不是总DNA有问题？总DNA有跑过电泳吗？条带清晰吗？什么时候提取的？是—80保存吗？

DNA是三个月前提取得，提取完以后就一直在零下八十度冰箱保存，近半个月拿用这个做模板做荧光定量，用别的引物能扩条带，拿出来以后再零下20度保存的

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5楼2015-10-16 14:02:36
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runye2015

新虫 (小有名气)
顶！大家帮我看一下吧!
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6楼2015-10-16 16:53:09
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tolobio

新虫 (小有名气)
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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-16 20:27:59
建议重新设计一条短些的引物，重新做个PCR，看看能否扩增出来，两个目的：1，看看是否是基因组DNA的问题；2，如果能够扩增出来的话，可以再以扩增产物为模板，用你的这对引物扩增。可能会容易些。可以联系我们www.tolobio.com；或者support@tolobio.com
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7楼2015-10-16 17:00:28
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马小瓜

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
runye2015: 金币+5 2015-10-16 20:44:13
你可以将总dna跑下电泳，确保模版没有问题，然后检查引物的情况

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8楼2015-10-16 20:42:41
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runye2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 马小瓜 at 2015-10-16 20:42:41
你可以将总dna跑下电泳，确保模版没有问题，然后检查引物的情况

好主意！！！

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9楼2015-10-16 20:44:27
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