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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求大神看下质粒双酶切图
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

[求助] 求大神看下质粒双酶切图 已有7人参与

pci-neo质粒用XBaI 和ECORI 双酶切，左边三个是没有酶切的质粒，右边第一个是和第三个用的是buffer 4  第二个用的是buffer1 ，这个图有没有切开啊？哪个切开了呢？求大神分析下，要怎么改进呢？

求大神看下质粒双酶切图
质粒pcineo 酶切 9.14.jpg
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1楼 2015-10-15 10:28:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

han3028730

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:14:06
请问Marker是多大的？Marker没怎么分开。不能判断各个条带有多大。
个人感觉用buffer4的切开了，产生了较大和较小的两条带，而用buffer1的似乎是单酶切产物，不知道理论上双酶切之后的两条带和用buffer4的两条带是否一致。
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3楼2015-10-15 10:44:02
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tolobio

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangpozi at 2015-10-15 10:38:44
求助啊！！！！！！！！！

质粒构建，现在已经比较成熟了。建议送到公司去做比较方便，质量、速度还有保证，价格也不贵。
http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110
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7楼2015-10-15 12:07:21
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云中子2014

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我看了你的图，照你提供的资料，第一可能片段内部还有你使用的酶切位点。第二，你是用的酶看看是不是有星号活性。另外重新跑一个阳性对照排除一下酶的问题。
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科研路上无坦途
13楼2015-10-16 19:47:01
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chenyhok1987

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议使用NEB公司的HF酶，很多通用BUFFER，而且也不用担心切得时间久而糊掉的，另外任何内切酶来切割都不能全部切点，切胶回收时候也可以让胶多跑一会，可以很好的线性分离回收，祝好~~~
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平生多磨砺，男儿自横行！
14楼2015-10-17 16:32:09
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普通回帖

jiangpozi

新虫 (小有名气)
求助啊！！！！！！！！！
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2楼2015-10-15 10:38:44
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2015-10-15 11:22:42
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by han3028730 at 2015-10-15 10:44:02
请问Marker是多大的？Marker没怎么分开。不能判断各个条带有多大。
个人感觉用buffer4的切开了，产生了较大和较小的两条带，而用buffer1的似乎是单酶切产物，不知道理论上双酶切之后的两条带和用buffer4的两条带是 ...

200bp marker 。buffer4 的下面较小的条带是800bp的 ，为什么有这么个条带呢？
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5楼2015-10-15 11:23:46
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-15 11:22:42
一般切开了都会产生两条不同的带的，酶的话不是有自己建议的Buffer吗？建议用推荐的Buffer来做

我只是质粒双酶切，两个酶切位点只有20bp左右，为什么会有800bp左右的带呢？而且上面的主带上好像也有几条带在一起？是为什么呢？
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6楼2015-10-15 11:26:54
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EasternCocoo

新虫 (初入文坛)
用的marker不对啊，弄个大点的marker，还有理论上你切完应该得到多大的条带，你要分析下啊，用VectorNTI分析下，然后再对照胶图看下，就知道切开没有啊！
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8楼2015-10-15 16:01:19
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EasternCocoo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:14:15
如果两个酶切位点之间的片段大小只有20 bp的话，那几乎就类似于线性化了，不过你要确定你质粒上的这两个酶切位点都是唯一的才行，而且切开后，理论上线性的质粒要跑得比较慢，所以条带可能会比原始质粒高一点。
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9楼2015-10-15 16:08:08
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EasternCocoo

新虫 (初入文坛)
还想冒昧问下，能否给点你现在做的这个PCINeo质粒呢，我现在的课题刚好要用到这个质粒，但是如果购买的话，从promega公司采购货期将近1个月，时间太久，实验耽误不起，所以挺急的，以后如果有什么需要的质粒或菌株，只要我能帮上忙的，都可以商量提供的，谢谢啊！
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10楼2015-10-15 16:11:55
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