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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助钙转慢病毒包装与转染经验
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七色锦

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助钙转慢病毒包装与转染经验 已有1人参与

各位大神帮帮忙我正在做慢病毒包装，求经验，我用的是三质粒系统，怎样提高慢病毒的包装效率？谢谢了
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1楼 2015-10-14 16:42:39
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
http://www.dxy.cn/bbs/topic/31028202去我帖子里看。有问题站短我。
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2楼2015-10-15 01:29:26
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七色锦

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-10-15 01:29:26
http://www.dxy.cn/bbs/topic/31028202去我帖子里看。有问题站短我。

谢谢你啊，，你用的是10ml体系的我用的是小皿，4ml体系，实验室师兄做逆病毒转染，转染效率很高，老师给我的protocol，跟他的那个差不多，所以我的一些操作也类似，用的试剂盒也是钙转的，好像是国外的试剂盒，我的三个质粒也是老师给我的，pCMV-dR8.2,VSV-G还有一个目的质粒，我抽提的质粒目的质粒864ng，dr是432，vsv是890 ，我想问一下这三个质粒加入各加入多少呀，转染的时候加了喹啉，换液是12小时换一下，再过大概12小时换一下,培养液是2ml然后再24小时后收病毒放在4度冰箱，重新加入2ml培养24小时后再收病毒，把这个病毒跟前天收的病毒一起离心1500转，用它直接转染目的细胞了，因为我转染的是白血病细胞，转染效率能在10%之上，我就可以把它sorting出来了，我的问题是我本身的病毒包装效率不能达到70%上所以我的目的细胞转染率就很低了，我是实验小白啦，希望大神多多帮助我，第一次在小木虫上发帖求助，不知道怎么弄的，看到有人回复我，我还是挺开心的
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3楼2015-10-15 10:10:30
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 七色锦 at 2015-10-15 10:10:30
谢谢你啊，，你用的是10ml体系的我用的是小皿，4ml体系，实验室师兄做逆病毒转染，转染效率很高，老师给我的protocol，跟他的那个差不多，所以我的一些操作也类似，用的试剂盒也是钙转的，好像是国外的试剂盒，我 ...

摸摸头，你加我151354061咱俩慢慢详细说。。。
话说，载体：dr：vsvg=4:3:1，总量你按照我之前的protocol换算一下。我转然前2h加CQ，转然后12h换液，在之后不换液了，48h收一次，再24h收一次，中间可以4度保存。当然，更好的办法是只收一次，收了就浓缩，然后直接感染。
转然后换液的时候最好加15mM的Hepes（我记得好像是这样，你再查查浓度）。
另外，转白血病细胞的话，好像带MSCV的病毒载体比较好。最好超速离心一下浓缩。
包慢病毒，我用lentiX293T细胞，效果比普通293T或者FT效果好很多。
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4楼2015-10-16 01:17:30
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
转染的话在对数生长期进行，这个时期细胞最易吸收外源质粒，但是不同细胞有所差异。看要怎么转染吧，如果是稳转细胞筛选，转染效率15%就够了，提高转染效率的话，可以适当降低转染时细胞的密度（60～70%的密度比90%好一些），另外还有可能就是细胞的生长状态，还有在接种后24h内进行转染。
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-11-13 16:44:37
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