24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 495  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

megan92

新虫 (初入文坛)

[求助] 有碰到相同情况的虫友 求指教 已有1人参与

用普通的Taq酶扩增,模板没有问题第一次扩增出来了,这次又p了一次,50ul的体系P了7个,模板浓度100ug/ul加了2ul,目的条带为503bp。
   结果很奇怪P完跑胶,第一个为2KPlus的mark,后面7个为我的样。可是6个都没有跑动全部卡到上样口,只有一个跑出来,大小也很准,为什么会出现这种情况,如果是引物问题,那为什么有一个可以跑出来了?求大神指教

有碰到相同情况的虫友 求指教
20151009.503.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鹄的什么的

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人认为,问题不在于没有PCR产物,只是PCR产物里面混的有蛋白质之类的东西,造成了凝胶阻滞,影响了核酸的电泳行为。maker能够跑开说明TAE或者TBE没有问题,如果能够排除loading buffer的问题的话,应该是你的PCR体系构建的有问题,(比如taq过量)或者大剂量的PCR产物长时间低温保存造成的部分碱基对紊乱,前者请自行摸索条件,后者在上样前56℃水浴2-3min即可。
P.S.你确定你的模板是100ug/uL???即使拿基因组当模板,一般加100-200ng已经是上限了
5楼2015-10-12 22:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

生工渣渣

新虫 (正式写手)

我之前遇到过全部在浓缩胶没跑开的情况,像这种跑一条出来还真没见过

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-12 17:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

517_

木虫 (小有名气)

没遇到过这种情况,重新配胶,把梳子洗干净,换新的缓冲液试试

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-10-12 19:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyao897

铁杆木虫 (正式写手)

4楼2015-10-12 20:00:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 319求调剂 +17 太容易1018 2026-04-01 17/850 2026-04-03 09:17 by zhouxiaoyu
[考研] 一志愿武汉理工0856,初试334 +3 26考研材料 2026-04-02 3/150 2026-04-02 21:22 by dongzh2009
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +7 王一一依依 2026-03-30 9/450 2026-04-02 21:15 by 1104338198
[考研] 一志愿北京工业大学,324分求调剂 +7 零八# 2026-03-28 7/350 2026-04-02 21:09 by 1104338198
[考研] 285求调剂 +8 AZMK 2026-04-02 11/550 2026-04-02 20:16 by yulian1987
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
[考研] 265求调剂11408 +4 刘小鹿lu 2026-03-27 4/200 2026-04-02 11:27 by guyan1000
[考研] 材料科学与工程调剂 +18 深V宿舍吧 2026-03-30 19/950 2026-04-02 10:28 by sanrepian
[考研] 292求调剂 +14 是妍子也是研子 2026-03-30 14/700 2026-04-02 10:17 by sanrepian
[考研] 372求调剂 +3 jj涌77 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:57 by olim
[考研] 085601材料工程找调剂 +20 oatmealR 2026-03-29 21/1050 2026-04-01 21:00 by lijunpoly
[考研] 265求调剂 +11 yelck 2026-04-01 12/600 2026-04-01 19:12 by 549790059
[考研] 生物与医药考研调剂 +5 铁憨憨123425 2026-03-31 5/250 2026-04-01 18:01 by syh9288
[考研] 0856,材料与化工321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-27 14/700 2026-04-01 15:58 by yanflower7133
[考研] 358求调剂 +3 王向阳花 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:56 by zzchen2000
[考研] 335求调剂 +3 321* 2026-03-31 4/200 2026-04-01 00:00 by 321*
[考博] 材料专业申博 +5 杜雨婷dyt 2026-03-29 5/250 2026-03-31 11:19 by oooqiao
[考研] 296求调剂 +10 彼岸t 2026-03-29 10/500 2026-03-30 10:50 by 探123
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学,化工,生物,生医工等专业优秀学子加入! +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
信息提示
请填处理意见