应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有碰到相同情况的虫友 求指教
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 490  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

megan92

新虫 (初入文坛)

[求助] 有碰到相同情况的虫友 求指教 已有1人参与

用普通的Taq酶扩增，模板没有问题第一次扩增出来了，这次又p了一次，50ul的体系P了7个，模板浓度100ug/ul加了2ul，目的条带为503bp。
   结果很奇怪P完跑胶，第一个为2KPlus的mark，后面7个为我的样。可是6个都没有跑动全部卡到上样口，只有一个跑出来，大小也很准，为什么会出现这种情况，如果是引物问题，那为什么有一个可以跑出来了？求大神指教

有碰到相同情况的虫友 求指教
20151009.503.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-10-12 16:51:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生工渣渣

新虫 (正式写手)
我之前遇到过全部在浓缩胶没跑开的情况，像这种跑一条出来还真没见过

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2015-10-12 17:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

517_

木虫 (小有名气)
没遇到过这种情况，重新配胶，把梳子洗干净，换新的缓冲液试试

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2015-10-12 19:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyao897

铁杆木虫 (正式写手)
楼主最好标注Marker

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-10-12 20:00:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鹄的什么的

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为，问题不在于没有PCR产物，只是PCR产物里面混的有蛋白质之类的东西，造成了凝胶阻滞，影响了核酸的电泳行为。maker能够跑开说明TAE或者TBE没有问题，如果能够排除loading buffer的问题的话，应该是你的PCR体系构建的有问题，（比如taq过量）或者大剂量的PCR产物长时间低温保存造成的部分碱基对紊乱，前者请自行摸索条件，后者在上样前56℃水浴2-3min即可。
P.S.你确定你的模板是100ug/uL？？？即使拿基因组当模板，一般加100-200ng已经是上限了
赞一下 回复此楼
5楼2015-10-12 22:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 megan92 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 330分求调剂 +15 qzenlc 2026-03-29 15/750 2026-04-02 21:41 by 百灵童888
[考研] 一志愿山东大学，085600，344 +7 魏子per 2026-04-02 8/400 2026-04-02 21:12 by 百灵童888
[考研] 351求调剂 +3 六兮昂啊 2026-03-27 3/150 2026-04-02 21:08 by dongzh2009
[考研] 312求调剂 +5 小小墨123 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:12 by dongzh2009
[考研] 318求调剂 +3 笃行致远. 2026-03-31 4/200 2026-04-02 15:56 by Jaylen.
[考研] 301求调剂 +14 骆驼男人 2026-04-02 14/700 2026-04-02 14:08 by baoball
[考研] 311求调剂 +9 勇敢的小吴 2026-04-02 9/450 2026-04-02 11:37 by Sammy2
[考研] 289求调剂 +23 新时代材料 2026-03-27 26/1300 2026-04-02 10:29 by oooqiao
[考研] 372求调剂 +3 jj涌77 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:57 by olim
[考研] 275求调剂 +12 waltzh 2026-04-01 12/600 2026-04-01 21:44 by chyhaha
[考研] 332求调剂 +8 Lyy930824@ 2026-03-29 8/400 2026-04-01 18:40 by 千钧澄玉宇啊
[考研] 英一数二生物信息学287分，本科生物科学，求调剂 +3 碧水xyz 2026-03-29 4/200 2026-04-01 15:35 by plum
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +15 Doleres 2026-03-31 16/800 2026-04-01 09:49 by lfj11
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业，初试351分，复试被刷求调剂! +9 真名有冰 2026-03-29 10/500 2026-03-31 18:01 by xhai2011
[考研] 本科211安全工程，初试290分，求调剂 +3 2719846834 2026-03-28 3/150 2026-03-31 13:52 by 热情沙漠
[考研] 313求调剂 +6 卖个关子吧 2026-03-31 6/300 2026-03-31 10:58 by Jaylen.
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
[考研] 303求调剂 +7 DLkz1314. 2026-03-30 7/350 2026-03-30 16:05 by shuang5186
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭