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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR扩增曲线在平台期出现二次扩增的原因
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足下客

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR扩增曲线在平台期出现二次扩增的原因 已有2人参与

用同样的反应体系检测两种阳参（这里用阳参A和阳参B做标记），两种阳参分开检测时，扩增曲线是正常的，但是在将两种阳参混合后再检测，其中阳参A的扩增曲线在平台期出现了二次扩增，阳参B的扩增曲线还是正常的。本来以为是探针引物设计的问题，两种阳参的扩增出现了交叉反应，所以用扩增阳参A的引物和探针扩增了一下阳参B，是没有任何扩增现象的。现在不知道是什么原因造成的，求高手指点。异常峰型的图片见附件。

荧光定量PCR扩增曲线在平台期出现二次扩增的原因
混合阳参检测O157.png
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1楼 2015-10-08 13:06:40
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足下客

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2015-10-09 13:37:51
有，很可能是你用的酶特异性不够，试着换个别的酶，或者用现有的酶用不同的reaction buffer进行尝试

用过热启动酶，单检时峰型就很差，用TaqB酶单检时峰型好。因为我是要做产品开发，所以峰型和灵敏度是很重要的。buffer是我们公司生产部配的，我没办法选择
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4楼2015-10-09 13:45:34
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足下客

木虫 (正式写手)
没有人遇到过这种情况吗？
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2楼2015-10-09 13:34:46
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
足下客: 金币+2, ★有帮助, 谢谢你的参与 2015-10-09 13:46:03
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-09 17:59:02
有，很可能是你用的酶特异性不够，试着换个别的酶，或者用现有的酶用不同的reaction buffer进行尝试
赞一下 回复此楼
3楼2015-10-09 13:37:51
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 足下客 at 2015-10-09 13:45:34
用过热启动酶，单检时峰型就很差，用TaqB酶单检时峰型好。因为我是要做产品开发，所以峰型和灵敏度是很重要的。buffer是我们公司生产部配的，我没办法选择...

产品开发本身就包括你的反应体系的选择和优化，不同的热启动酶需要不同的反应系统搭配
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5楼2015-10-09 13:51:30
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