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足下客

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR扩增曲线在平台期出现二次扩增的原因 已有2人参与

用同样的反应体系检测两种阳参(这里用阳参A和阳参B做标记),两种阳参分开检测时,扩增曲线是正常的,但是在将两种阳参混合后再检测,其中阳参A的扩增曲线在平台期出现了二次扩增,阳参B的扩增曲线还是正常的。本来以为是探针引物设计的问题,两种阳参的扩增出现了交叉反应,所以用扩增阳参A的引物和探针扩增了一下阳参B,是没有任何扩增现象的。现在不知道是什么原因造成的,求高手指点。异常峰型的图片见附件。

荧光定量PCR扩增曲线在平台期出现二次扩增的原因
混合阳参检测O157.png
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
足下客: 金币+2, 有帮助, 谢谢你的参与 2015-10-09 13:46:03
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-09 17:59:02
有,很可能是你用的酶特异性不够,试着换个别的酶,或者用现有的酶用不同的reaction buffer进行尝试
3楼2015-10-09 13:37:51
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足下客

木虫 (正式写手)

没有人遇到过这种情况吗?
2楼2015-10-09 13:34:46
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足下客

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2015-10-09 13:37:51
有,很可能是你用的酶特异性不够,试着换个别的酶,或者用现有的酶用不同的reaction buffer进行尝试

用过热启动酶,单检时峰型就很差,用TaqB酶单检时峰型好。因为我是要做产品开发,所以峰型和灵敏度是很重要的。buffer是我们公司生产部配的,我没办法选择
4楼2015-10-09 13:45:34
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love_st

金虫 (著名写手)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 足下客 at 2015-10-09 13:45:34
用过热启动酶,单检时峰型就很差,用TaqB酶单检时峰型好。因为我是要做产品开发,所以峰型和灵敏度是很重要的。buffer是我们公司生产部配的,我没办法选择...

产品开发本身就包括你的反应体系的选择和优化,不同的热启动酶需要不同的反应系统搭配
5楼2015-10-09 13:51:30
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