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397608492

新虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-10-08 12:13:20
我不知道是否科学,我一般做十个以内。转速三百
...

你做的会有差别么?

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21楼2015-10-08 12:26:21
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-08 12:26:21
你做的会有差别么?
...

表达量高低是有区别的,具体方法看你检测方法

发自小木虫Android客户端
22楼2015-10-08 12:59:28
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

23楼2015-10-08 15:58:14
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

24楼2015-10-08 16:05:28
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

25楼2015-10-08 16:06:27
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

26楼2015-10-08 16:08:40
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

引用回帖:
26楼: Originally posted by -字仲康 at 2015-10-08 16:08:40
我们所做的是,锥形瓶用个是500mL的,装液量为50mL,培养的转速为220rpm...

这个梯度筛选在哪个浓度表达量高还真不好预计。五百的摇瓶在初筛阶段工作量很大呀。你们测表达量用什么方法呢?

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27楼2015-10-08 17:09:53
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

引用回帖:
26楼: Originally posted by -字仲康 at 2015-10-08 16:08:40
我们所做的是,锥形瓶用个是500mL的,装液量为50mL,培养的转速为220rpm...

不好意思看错了装液量了,嘿嘿。

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28楼2015-10-08 17:11:13
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不确定你博莱霉素是怎么筛多拷贝的,只要方法得当1000ng筛出来的已经是多拷贝了,换pic9K再筛更高拷贝我估计分泌量不会提高多少,
1.LZ你可以破碎一下甲醇诱导后的菌体,我感觉胞内可能会有蛋白积累。如果有明显的积累那就不是表达量高低的问题。
2.如果确证是表达量低,你发酵条件的问题对表达量影响更大,代谢甲醇完全靠溶氧,转速至少200转是不行的,如果条件不允许,完全可以做一个不同梯度装液量的实验,无论拷贝数高低都拿一个转化子来做一下。
3.至于你加amp无非是想把杂菌给压下去,应该可以,就怕那个杂菌不怕amp,还是多注意注意操作吧

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大家相互帮助哈
29楼2015-10-09 02:34:17
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397608492

新虫 (小有名气)

引用回帖:
29楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-10-09 02:34:17
不确定你博莱霉素是怎么筛多拷贝的,只要方法得当1000ng筛出来的已经是多拷贝了,换pic9K再筛更高拷贝我估计分泌量不会提高多少,
1.LZ你可以破碎一下甲醇诱导后的菌体,我感觉胞内可能会有蛋白积累。如果有明显的积 ...

我测定酶活检测的,胞内确实有显著的活力,但是我的目的基因是通过同源臂克隆插入a信号肽的GAAGCT后,也就是维持天然N端,C端自带了载体上的myc和his tag。会有问题吗?

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30楼2015-10-09 07:37:17
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