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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 毕赤酵母高拷贝筛选
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397608492

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by duoyidian at 2015-10-07 10:47:53
那就直接筛啊，然后做个摇瓶就好了...

是从最高抗性浓度的平板上选几个做摇瓶么？

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11楼2015-10-07 12:36:15
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duoyidian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-07 12:36:15
是从最高抗性浓度的平板上选几个做摇瓶么？
...

对于不同的蛋白拷贝数与目的蛋白产量的关系是不确定的，有的蛋白在较低拷贝数下的蛋白产量反而较高，这些都是说不清的额，具体情况具体分析，看自己的目的与课题要求而定
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12楼2015-10-07 12:55:08
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397608492

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by duoyidian at 2015-10-07 12:55:08
对于不同的蛋白拷贝数与目的蛋白产量的关系是不确定的，有的蛋白在较低拷贝数下的蛋白产量反而较高，这些都是说不清的额，具体情况具体分析，看自己的目的与课题要求而定...

那我能不能把平板上所有的转化子都在96孔板里培养进行筛选？

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13楼2015-10-07 17:40:08
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duoyidian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
397608492: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-10-08 07:26:45
引用回帖:
13楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-07 17:40:08
那我能不能把平板上所有的转化子都在96孔板里培养进行筛选？
...

检测方便就行啊，这都是一些基础的重复操作，你可以多尝试一些，只要你有时间
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14楼2015-10-07 18:14:07
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397608492

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by duoyidian at 2015-10-07 18:14:07
检测方便就行啊，这都是一些基础的重复操作，你可以多尝试一些，只要你有时间...

但之前做了一次，不知道是不是因为深孔板溶氧不行，导致不产酶。。。

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15楼2015-10-07 22:32:39
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397608492

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-10-05 00:11:58
梯度加压，增加zeocin浓度，筛选到2000的浓度，调取克隆进行表达小试进一步筛选。根据经验，高浓度板子上长出来的克隆表达量不见得高，曾有过不表达的情况。

是每一个梯度下挑几个做摇瓶么？

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16楼2015-10-08 07:27:43
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
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16楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-08 07:27:43
是每一个梯度下挑几个做摇瓶么？
...

我们的做法是最高浓度板子上挑克隆。另外，96孔板固然方便，但是对于酵母菌，个人认为不太好用，溶氧少，空间小，建议五十毫升锥形瓶，10～15毫升装液量试试

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17楼2015-10-08 07:55:11
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397608492

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-10-08 07:55:11
我们的做法是最高浓度板子上挑克隆。另外，96孔板固然方便，但是对于酵母菌，个人认为不太好用，溶氧少，空间小，建议五十毫升锥形瓶，10～15毫升装液量试试
...

做多少个呢？

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18楼2015-10-08 09:19:03
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397608492

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-10-08 07:55:11
我们的做法是最高浓度板子上挑克隆。另外，96孔板固然方便，但是对于酵母菌，个人认为不太好用，溶氧少，空间小，建议五十毫升锥形瓶，10～15毫升装液量试试
...

另外还想问问，因为我们的摇床对于摇瓶最高只能200rpm，所以想问问对策。

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19楼2015-10-08 09:21:17
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-08 09:21:17
另外还想问问，因为我们的摇床对于摇瓶最高只能200rpm，所以想问问对策。
...

我不知道是否科学，我一般做十个以内。转速三百

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20楼2015-10-08 12:13:20
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