【答案】应助回帖

11楼2015-10-07 12:36:15

duoyidian

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【答案】应助回帖

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11楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-07 12:36:15
是从最高抗性浓度的平板上选几个做摇瓶么？
...

对于不同的蛋白拷贝数与目的蛋白产量的关系是不确定的，有的蛋白在较低拷贝数下的蛋白产量反而较高，这些都是说不清的额，具体情况具体分析，看自己的目的与课题要求而定

12楼2015-10-07 12:55:08

397608492

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12楼: Originally posted by duoyidian at 2015-10-07 12:55:08
对于不同的蛋白拷贝数与目的蛋白产量的关系是不确定的，有的蛋白在较低拷贝数下的蛋白产量反而较高，这些都是说不清的额，具体情况具体分析，看自己的目的与课题要求而定...

那我能不能把平板上所有的转化子都在96孔板里培养进行筛选？

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13楼2015-10-07 17:40:08

duoyidian

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【答案】应助回帖

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397608492: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-10-08 07:26:45

引用回帖:

13楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-07 17:40:08
那我能不能把平板上所有的转化子都在96孔板里培养进行筛选？
...

检测方便就行啊，这都是一些基础的重复操作，你可以多尝试一些，只要你有时间

14楼2015-10-07 18:14:07

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14楼: Originally posted by duoyidian at 2015-10-07 18:14:07
检测方便就行啊，这都是一些基础的重复操作，你可以多尝试一些，只要你有时间...

但之前做了一次，不知道是不是因为深孔板溶氧不行，导致不产酶。。。

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15楼2015-10-07 22:32:39

397608492

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2楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-10-05 00:11:58
梯度加压，增加zeocin浓度，筛选到2000的浓度，调取克隆进行表达小试进一步筛选。根据经验，高浓度板子上长出来的克隆表达量不见得高，曾有过不表达的情况。

是每一个梯度下挑几个做摇瓶么？

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16楼2015-10-08 07:27:43

mlbiosci

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16楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-08 07:27:43
是每一个梯度下挑几个做摇瓶么？
...

我们的做法是最高浓度板子上挑克隆。另外，96孔板固然方便，但是对于酵母菌，个人认为不太好用，溶氧少，空间小，建议五十毫升锥形瓶，10～15毫升装液量试试

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17楼2015-10-08 07:55:11

397608492

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17楼: Originally posted by mlbiosci at 2015-10-08 07:55:11
我们的做法是最高浓度板子上挑克隆。另外，96孔板固然方便，但是对于酵母菌，个人认为不太好用，溶氧少，空间小，建议五十毫升锥形瓶，10～15毫升装液量试试
...

做多少个呢？

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18楼2015-10-08 09:19:03

397608492

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另外还想问问，因为我们的摇床对于摇瓶最高只能200rpm，所以想问问对策。

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19楼2015-10-08 09:21:17

mlbiosci

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19楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-08 09:21:17
另外还想问问，因为我们的摇床对于摇瓶最高只能200rpm，所以想问问对策。
...

我不知道是否科学，我一般做十个以内。转速三百

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20楼2015-10-08 12:13:20