| 查看: 5520 | 回复: 39 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
毕赤酵母高拷贝筛选 已有2人参与
|
|||
|
如题，本人新手，做蛋白分子改造的，之前将目的基因构建在pPICZaA和pGAPZaA上并利用博莱霉素筛选高拷贝，浓度达到1ug/ml，菌落PCR后挑取阳性菌落摇瓶表达，结果表达量极低。现在改变策略构建到pPIC9K上用G418筛选高拷贝，想问问各位达人G418能不能和氨苄同时使用，因为之前做的时候涂布His+转化子的G418平板老是不长酵母而长杂菌。另外还想问问是不是带有his tag的蛋白酵母的表达量会降低？因为我想要拿比较高表达量的菌株对该蛋白进行表征。有文献建议His+转化子不经过G418筛选高拷贝而直接以深孔板培养筛选高表达量菌株，各位觉得哪种方法更靠谱呢？在同一个梯度的平板上，各菌株的表达量差异会否很大？ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有163人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- ppic9k转GS115筛选表达问题。
已经有4人回复
- 想做毕赤酵母的高拷贝表达
已经有2人回复
- 酵母表型筛选那块
已经有0人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 【求助/交流】求高人指点，毕赤酵母和酿酒酵母
已经有2人回复
3楼2015-10-05 00:25:14
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-10-07 22:53:11
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-10-07 22:53:11
|
梯度加压，增加zeocin浓度，筛选到2000的浓度，调取克隆进行表达小试进一步筛选。根据经验，高浓度板子上长出来的克隆表达量不见得高，曾有过不表达的情况。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2015-10-05 00:11:58
4楼2015-10-05 12:29:11
送红花一朵 |
谢谢你，还想问问摇瓶是挡板瓶还是普通的呢？因为实验室摇床无法到300rpm，最多到200rpm，害怕溶氧不行。我想做小一点的，50ml一个。选几个比较合适啊？因为我最高浓度的平板上也有接近50个。总不能都挑吧。。。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2015-10-05 12:36:22
