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ImEven

新虫 (初入文坛)

[求助] 豚鼠肝细胞剪碎用胰酶消化后用300目筛网过滤不了 已有2人参与

豚鼠肝细胞眼科剪剪碎后用胰酶消化30分钟再用300目筛网过滤不了,消化后有大量黏稠液,应该是这些堵住了筛孔,求大神指点这些粘稠液是什么?怎么才能让细胞顺利筛过筛网?消化后再把粘稠液去掉过筛虽然可以顺利过滤了,但是这样一来单个细胞也被去除了吧,这样过滤后在显微镜下也看不到多少细胞了…求大神指教!!

豚鼠肝细胞剪碎用胰酶消化后用300目筛网过滤不了


豚鼠肝细胞剪碎用胰酶消化后用300目筛网过滤不了-1


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najura

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
消化后加入DT的5倍体积的含10%FBS的完全培养基,轻轻混匀摇晃,中和胰酶,然后在过筛,就不会很粘稠了,必要时可以加DNAse I

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2楼2015-09-27 11:20:14
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ImEven

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by najura at 2015-09-27 11:20:14
消化后加入DT的5倍体积的含10%FBS的完全培养基,轻轻混匀摇晃,中和胰酶,然后在过筛,就不会很粘稠了,必要时可以加DNAse I

DT是什么…

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3楼2015-09-27 11:47:14
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ImEven

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by najura at 2015-09-27 11:20:14
消化后加入DT的5倍体积的含10%FBS的完全培养基,轻轻混匀摇晃,中和胰酶,然后在过筛,就不会很粘稠了,必要时可以加DNAse I

是胰酶的5倍体积的10%FBS吗?我按文献上的是一比一比例加的小牛血清就还是很黏稠
豚鼠肝细胞剪碎用胰酶消化后用300目筛网过滤不了-2



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4楼2015-09-27 11:49:40
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najura

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
ImEven: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢你!今天试了你的方法过滤效果非常好! 2015-09-28 16:55:19
dt是含有0.02%edta的0.25%胰酶,在消化液中加入5倍体积的完全培养基(其中含有10%FBS),就不会很粘了

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5楼2015-09-27 14:17:49
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ImEven

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by najura at 2015-09-27 14:17:49
dt是含有0.02%edta的0.25%胰酶,在消化液中加入5倍体积的完全培养基(其中含有10%FBS),就不会很粘了

好的谢谢,我明天去试试看

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6楼2015-09-27 15:53:55
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najura

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ImEven at 2015-09-27 15:53:55
好的谢谢,我明天去试试看
...

祝成功

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7楼2015-09-27 23:36:09
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liang_423

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用注射器加过滤头的那种。要加压才行!!
8楼2015-09-28 16:49:41
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

消化时间太长了,细胞裂解释放出了大量DNA,所以粘稠,消化的时候要看着点组织块的状态,也可以试一下胶原酶,初次做实验的话要做预实验,不同的组织消化时间是不一样的,注意镜下观察
9楼2015-09-30 17:57:35
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