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andywang6137木虫 (著名写手)
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[求助]
最近TA克隆老是失败，请大家分析一下。已有9人参与
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PCR产物，胶回收后TA克隆，板子总长成这样，请高手分析一下原因。taq酶，宝生物的；胶回收试剂盒，全式金的；T载体，用过生工和全式金的。感受态细胞，全式金和自己制备的。之前还做出来了，上学的时候TA克隆也没出过问题，现在涂的板子老是长成下面图片这样。我自己动手做了一次，2个研究生做了一次都是下面的结果（图1：准备回收的目的片段；图2-4，平板菌液，学生发过来的，忘记那一个是水做的对照）。分析不出来原因，请高手分析一下。谢谢！ 0.jpg  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
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【答案】应助回帖
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做TA克隆一团糊，基本就是平板菌量太高所致，有两个方面，一方面是转化效率太高，主要是目的片段太短，复苏时间过长，过分集菌以及培养时间过长等原因所致，第二方面就是抗生素起不到作用，这又有两个方面，一是抗生素失效，无法杀死空菌，二是抗生素假失效，即感受态本身含有T质粒，无论该质粒连接的是什么片段，抗生素均不能将其杀死，导致糊成一片，从而表现出抗生素失效。 从你给出的数据，出问题的可能是第二方面的第一点，换个抗生素试试吧 发自小木虫Android客户端 |
11楼2015-09-27 22:40:58
chenli1017
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2楼2015-09-25 18:33:37
songjie851
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3楼2015-09-25 20:00:12
cosmoslight
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4楼2015-09-25 20:08:16