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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 荧光质粒转到hela细胞的问题
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] 荧光质粒转到hela细胞的问题 已有2人参与

最近做基因的真核表达，在hela细胞中表达，因为不知道目的基因是否转染到细胞内，所以同时用绿色荧光蛋白质粒转到细胞中做对照，（我的想法:如果荧光蛋白表达了，说明我的操作没问题，如果荧光蛋白不表达，说明可能是我的操作有问题），现在遇到的问题是:荧光显微镜下没有正常活细胞的荧光蛋白表达，但是荧光显微镜下的死细胞有荧光，这是为什么？

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1楼 2015-09-24 16:45:17
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 830409 at 2015-09-30 14:04:18
正常活细胞没有荧光说明转染失败，死细胞有荧光，理论上是自发荧光，切荧光强度应该不大，目的荧光应该是很亮的。

是没转进去，但是死细胞为什么会有荧光呢

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6楼2015-09-30 15:42:42
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越加油

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1：首先确定你的荧光质粒有没有问题，报告基因到底表不表达。
2：可能是转染时间短，荧光表达弱。可以转染时间长一点后再观察，增大显微镜曝光等。
3：转染条件没控制到最佳。
3：不同的细胞系对同一质粒敏感度不一样，可以考虑换别的细胞系看看。
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2楼2015-09-24 18:11:57
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 越加油 at 2015-09-24 18:11:57
1：首先确定你的荧光质粒有没有问题，报告基因到底表不表达。
2：可能是转染时间短，荧光表达弱。可以转染时间长一点后再观察，增大显微镜曝光等。
3：转染条件没控制到最佳。
3：不同的细胞系对同一质粒敏感度不 ...

之前用6孔板做转染荧光质粒，不同条件下对照，有一次相同条件一个孔板有荧光，很明显，另一个就没有，之后相同条件下也没有了

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3楼2015-09-24 18:52:33
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果出现荧光的话，GFP荧光是表达的，但你要确定你的目的基因和GFP基因是否是同一个启动子表达的，建议你在转染时降低转染试剂的比例，扩大细胞浓度，延长转染时间
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医学&统计学
4楼2015-09-26 14:05:37
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