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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 跪求铁皮石斛RNA提取方法
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astwenth

新虫 (初入文坛)

[求助] 跪求铁皮石斛RNA提取方法 已有6人参与

急急急， 各位大神，小弟最近尝试用过各种方法提过铁皮石斛的RNA，用过TIANGEN公司的多糖多酚试剂盒，天恩泽公司的植物RNAout试剂盒，并且送到3家生物公司去提取过，结果提取效果都不好，有的很模糊，有的直接没有。有提过这种药用植物或者同学提过这种药物的大神吗？有的话麻烦指导一下小弟，不胜感激。上传的有两张最近公司提取得到的RNA图片。跪求铁皮石斛RNA提取方法
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跪求铁皮石斛RNA提取方法-1
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  • 附件 1 : RNA.Tif
    • 2015-09-21 17:56:41, 1.25 M

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1楼 2015-09-21 18:01:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 19:29:44
提过藏红花，紫杉，雪莲，肉苁蓉，烟草，拟南芥，兰花，月季。
没提过铁皮石斛，不过这植物看上去还好，不应该是很难提取的样子啊，多尝试一些方法吧。
第一张图还可以啊，用来反转录做qrt-pcr是够了。
要是做转 ...

二楼的貌似没提过RNA，第一张图都那个样子还说提的好，居心何在？

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3楼2015-09-21 21:02:52
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 21:02:52
二楼的貌似没提过RNA，第一张图都那个样子还说提的好，居心何在？
...

5年前做的变性RNA电泳，呵呵
跪求铁皮石斛RNA提取方法-2
IMG_2284.JPG
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9楼2015-09-21 21:59:51
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naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 21:14:21
我这位没提过RNA的给您看看
我提取的紫杉细胞的RNA的凝胶电泳和agilent2100的检测的区别，对了，这个电泳的浓度是稀释10倍的。
您提取的比这个好就拿出来秀秀。

2.png

1.png
...

这个是转录组测序用的，完整度要求达到8.5以上。
一般反转录成cDNA，克隆一两个基因，做几个基因的rt-pcr，楼主那张图的RNA是可以凑合用的。
但是用于race和测序，有降解，完整度堪忧，需要慎重。
从楼主第一张图看，方法还凑合可以，控制好RNA酶活性，提高手艺可以解决完整度。
不知道楼主用了多少材料提取的，浓度偏低。提高浓度从三个方面解决：裂解效率，多糖多酚去除，取嫩的组织。
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14楼2015-09-21 22:19:33
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naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
astwenth: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:42:58
提过藏红花，紫杉，雪莲，肉苁蓉，烟草，拟南芥，兰花，月季。
没提过铁皮石斛，不过这植物看上去还好，不应该是很难提取的样子啊，多尝试一些方法吧。
第一张图还可以啊，用来反转录做qrt-pcr是够了。
要是做转录组测序，或者做race的话，好像是有些降解了。
看完整性的话，条件好的话，用agilent2100检测一下就可以了，一般的琼脂糖电泳只能大概的看，不过我不太看好你的第一张图的完整性。
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2楼2015-09-21 19:29:44
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
astwenth: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:43:43
我提过一些比较难的，愿试试

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4楼2015-09-21 21:03:50
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 21:02:52
二楼的貌似没提过RNA，第一张图都那个样子还说提的好，居心何在？
...

就您提取过RNA，呵呵！您还提取过很难的，拿出来看看啊！
就您看过好的RNA是什么样子啊！

凝胶电泳一般跑出来会差点意思，就那个电泳图来说，一般实验够用了，我也明确说了不能用于race和测序，您的眼睛长得真好。

牛人秀一下啊！
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5楼2015-09-21 21:10:29
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 21:03:50
我提过一些比较难的，愿试试

我这位没提过RNA的给您看看
我提取的紫杉细胞的RNA的凝胶电泳和agilent2100的检测的区别，对了，这个电泳的浓度是稀释10倍的。
您提取的比这个好就拿出来秀秀。
跪求铁皮石斛RNA提取方法-3
2.png


跪求铁皮石斛RNA提取方法-4
1.png
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6楼2015-09-21 21:14:21
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
astwenth: 金币+1 2015-09-23 14:44:05
我们提的非常好，天天做反转录，荧光定量pcr

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7楼2015-09-21 21:15:24
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
样本是新鲜的还是保存的？是新鲜的话那可能是操作上的的问题，如果是保存的样本再提取RNA，可能是因为保存不当引起的。从-70的冰箱再拿出来如果不立刻进行提取的话RNA会降解的。
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。
8楼2015-09-21 21:45:51
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 21:02:52
二楼的貌似没提过RNA，第一张图都那个样子还说提的好，居心何在？
...

07年年底做microarray所用的RNA检测，这个是拟南芥的，好提取，质量可好了，呵呵！
跪求铁皮石斛RNA提取方法-5
3.png
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10楼2015-09-21 22:02:44
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