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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 跪求铁皮石斛RNA提取方法
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
28楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:52:45
qRT-PCR片段只需要100多bp长度的模板左右就行，qRT-pcr的引物是oligo-dt和随机引物的混合物，有些降解并不影响反转录，并且降解基本对所有的RNA是一一致的，个人认为从原理上来看有些降解并不会影响结果。260/280在 ...

反正RNA胶图不好我是不会考虑做下一步的，反转录用oligo d t，绝不会考虑用随机引物，它会引入非mRNA，而我们一般考察的大多是mRNA

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31楼2015-09-21 22:57:14
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naringenin

新虫 (小有名气)
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30楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:54:35
修改：qRT-pcr的cDNA模板反转录时候的引物是oligo-dt和随机引物的混合物...

另外，这个降解也很难说是本身提取不好，还是电泳不好造成的，毕竟楼主提供的信息不全。

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32楼2015-09-21 23:17:47
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
31楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:57:14
反正RNA胶图不好我是不会考虑做下一步的，反转录用oligo d t，绝不会考虑用随机引物，它会引入非mRNA，而我们一般考察的大多是mRNA
...

你可以看看一些qrt试剂盒，至少宝生物的，反转录的时候用的引物，我没记错的话是两者的混合。

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33楼2015-09-21 23:20:26
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
33楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 23:20:26
你可以看看一些qrt试剂盒，至少宝生物的，反转录的时候用的引物，我没记错的话是两者的混合。
...

年轻人，还是静下心来学点真本事吧。。。

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34楼2015-09-21 23:23:45
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
34楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 23:23:45
年轻人，还是静下心来学点真本事吧。。。
...

您给人扣大帽的能力鄙人是学不来了。另外不是教授就少在我面前充老人。不同意见了还是何居心都出来了，学术圈不欢迎这种人，真要是给别人评审基金还得了！

鄙人不爱说大话，没查证前不会把话说死，自己去看说明书吧，懒得和这种喜欢说大话，扣帽子的人说什么了，想来您觉得宝生物的一众科学家也是没啥水平了。

另，看来您家的pcr引物都是闭着眼设计的，或者非mRNA的序列和mRNA的除了polyA其它都一样了，呵呵！

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35楼2015-09-22 08:25:13
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前进武神

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
astwenth: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:47:57
用传统提法，不要用kit

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36楼2015-09-22 08:45:11
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astwenth

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-09-21 21:45:51
样本是新鲜的还是保存的？是新鲜的话那可能是操作上的的问题，如果是保存的样本再提取RNA，可能是因为保存不当引起的。从-70的冰箱再拿出来如果不立刻进行提取的话RNA会降解的。

第一张图是铁皮石斛组培苗提取的，第二张图是存放于液氮中一个月后提取的。
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37楼2015-09-22 10:51:14
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astwenth

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by jackyoung at 2015-09-21 22:41:41
大家都这么讲究，效果都不错，但是到楼主这里就不行了。建议你用最简单的CTAB法试一下，如果不行我再给你个配方，别迷信试剂盒，手制更靠谱。

谢谢了，我也打算自己配制最简单的CTAB方法尝试一下，麻烦发给我一份，谢谢。
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38楼2015-09-22 10:54:55
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astwenth

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 19:29:44
提过藏红花，紫杉，雪莲，肉苁蓉，烟草，拟南芥，兰花，月季。
没提过铁皮石斛，不过这植物看上去还好，不应该是很难提取的样子啊，多尝试一些方法吧。
第一张图还可以啊，用来反转录做qrt-pcr是够了。
要是做转 ...

嗯，第一张图是用新鲜的组培苗提取的，生物公司建议我做荧光定量，我没有做。
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39楼2015-09-22 11:01:51
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astwenth

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 21:03:50
我提过一些比较难的，愿试试

你好，能留下联系方式吗？
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40楼2015-09-22 11:03:04
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