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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
28楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:52:45
qRT-PCR片段只需要100多bp长度的模板左右就行,qRT-pcr的引物是oligo-dt和随机引物的混合物,有些降解并不影响反转录,并且降解基本对所有的RNA是一一致的,个人认为从原理上来看有些降解并不会影响结果。260/280在 ...

反正RNA胶图不好我是不会考虑做下一步的,反转录用oligo d t,绝不会考虑用随机引物,它会引入非mRNA,而我们一般考察的大多是mRNA

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31楼2015-09-21 22:57:14
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naringenin

新虫 (小有名气)

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30楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:54:35
修改:qRT-pcr的cDNA模板反转录时候的引物是oligo-dt和随机引物的混合物...

另外,这个降解也很难说是本身提取不好,还是电泳不好造成的,毕竟楼主提供的信息不全。

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32楼2015-09-21 23:17:47
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
31楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:57:14
反正RNA胶图不好我是不会考虑做下一步的,反转录用oligo d t,绝不会考虑用随机引物,它会引入非mRNA,而我们一般考察的大多是mRNA
...

你可以看看一些qrt试剂盒,至少宝生物的,反转录的时候用的引物,我没记错的话是两者的混合。

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33楼2015-09-21 23:20:26
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
33楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 23:20:26
你可以看看一些qrt试剂盒,至少宝生物的,反转录的时候用的引物,我没记错的话是两者的混合。
...

年轻人,还是静下心来学点真本事吧。。。

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34楼2015-09-21 23:23:45
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
34楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 23:23:45
年轻人,还是静下心来学点真本事吧。。。
...

您给人扣大帽的能力鄙人是学不来了。另外不是教授就少在我面前充老人。不同意见了还是何居心都出来了,学术圈不欢迎这种人,真要是给别人评审基金还得了!

鄙人不爱说大话,没查证前不会把话说死,自己去看说明书吧,懒得和这种喜欢说大话,扣帽子的人说什么了,想来您觉得宝生物的一众科学家也是没啥水平了。

另,看来您家的pcr引物都是闭着眼设计的,或者非mRNA的序列和mRNA的除了polyA其它都一样了,呵呵!

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35楼2015-09-22 08:25:13
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前进武神

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
astwenth: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:47:57
用传统提法,不要用kit

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36楼2015-09-22 08:45:11
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astwenth

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-09-21 21:45:51
样本是新鲜的还是保存的?是新鲜的话那可能是操作上的的问题,如果是保存的样本再提取RNA,可能是因为保存不当引起的。从-70的冰箱再拿出来如果不立刻进行提取的话RNA会降解的。

第一张图是铁皮石斛组培苗提取的,第二张图是存放于液氮中一个月后提取的。
37楼2015-09-22 10:51:14
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astwenth

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
22楼: Originally posted by jackyoung at 2015-09-21 22:41:41
大家都这么讲究,效果都不错,但是到楼主这里就不行了。建议你用最简单的CTAB法试一下,如果不行我再给你个配方,别迷信试剂盒,手制更靠谱。

谢谢了,我也打算自己配制最简单的CTAB方法尝试一下,麻烦发给我一份,谢谢。
38楼2015-09-22 10:54:55
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astwenth

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 19:29:44
提过藏红花,紫杉,雪莲,肉苁蓉,烟草,拟南芥,兰花,月季。
没提过铁皮石斛,不过这植物看上去还好,不应该是很难提取的样子啊,多尝试一些方法吧。
第一张图还可以啊,用来反转录做qrt-pcr是够了。
要是做转 ...

嗯,第一张图是用新鲜的组培苗提取的,生物公司建议我做荧光定量,我没有做。
39楼2015-09-22 11:01:51
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astwenth

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 21:03:50
我提过一些比较难的,愿试试

你好,能留下联系方式吗?
40楼2015-09-22 11:03:04
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