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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 21:02:52
二楼的貌似没提过RNA,第一张图都那个样子还说提的好,居心何在?
...

10年前提取的RNA,多糖多酚类的植物。那时候手艺差,质量一般,让大牛见笑了。
跪求铁皮石斛RNA提取方法
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11楼2015-09-21 22:10:38
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:02:44
07年年底做microarray所用的RNA检测,这个是拟南芥的,好提取,质量可好了,呵呵!

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...

拿拟南芥的结果出来,貌似有点搪塞人,拟南芥生长环境极好,杂质也少,随便提都能提的很好,野外的样提过么?

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12楼2015-09-21 22:11:49
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baichi121234

禁虫 (职业作家)

本帖内容被屏蔽

13楼2015-09-21 22:15:16
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naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 21:14:21
我这位没提过RNA的给您看看
我提取的紫杉细胞的RNA的凝胶电泳和agilent2100的检测的区别,对了,这个电泳的浓度是稀释10倍的。
您提取的比这个好就拿出来秀秀。

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...

这个是转录组测序用的,完整度要求达到8.5以上。
一般反转录成cDNA,克隆一两个基因,做几个基因的rt-pcr,楼主那张图的RNA是可以凑合用的。
但是用于race和测序,有降解,完整度堪忧,需要慎重。
从楼主第一张图看,方法还凑合可以,控制好RNA酶活性,提高手艺可以解决完整度。
不知道楼主用了多少材料提取的,浓度偏低。提高浓度从三个方面解决:裂解效率,多糖多酚去除,取嫩的组织。
14楼2015-09-21 22:19:33
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:11:49
拿拟南芥的结果出来,貌似有点搪塞人,拟南芥生长环境极好,杂质也少,随便提都能提的很好,野外的样提过么?
...

看来您的眼睛真的瞎了,没看到前面的紫杉细胞的RNA么,细胞是褐色的哦!我可不敢忽悠您哦!
就您提过野外的啊?不好意思,我提取的兰花和月季都是野外的。
15楼2015-09-21 22:23:02
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Neo2000

木虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:23:02
看来您的眼睛真的瞎了,没看到前面的紫杉细胞的RNA么,细胞是褐色的哦!我可不敢忽悠您哦!
就您提过野外的啊?不好意思,我提取的兰花和月季都是野外的。...

人家发帖求助来着,有本事,你帮他搞定得了,叽叽歪歪,得瑟啥

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16楼2015-09-21 22:25:56
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:11:49
拿拟南芥的结果出来,貌似有点搪塞人,拟南芥生长环境极好,杂质也少,随便提都能提的很好,野外的样提过么?
...

主要是让您看看啥叫变性电泳的图,
现在的年轻人都是qRT-pcr了,谁还做northern啊,谁还做变性电泳啊。
张口就说别人没提过,您可真牛!
17楼2015-09-21 22:26:01
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Neo2000

木虫 (著名写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:26:01
主要是让您看看啥叫变性电泳的图,
现在的年轻人都是qRT-pcr了,谁还做northern啊,谁还做变性电泳啊。
张口就说别人没提过,您可真牛!...

既然你这么专业,拜托你下次回帖的时候显得专业一点,搞得跟个门外汉似的,我当然打抱不平哈

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18楼2015-09-21 22:28:17
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:25:56
人家发帖求助来着,有本事,你帮他搞定得了,叽叽歪歪,得瑟啥
...

我先也只是回复别人的求助啊,不知道哪个眼睛瞎了先嘚瑟的。
我可搞不定,不像您是大牛人,什么都能搞定!
每种植物,每种组织的RNA提取方法都是不一样的,特别是对含多糖多酚的植物来说,需要多种不同方法尝试,摸索,不是那么好搞的。
同样的方法,对同样物种的不同细胞,组织效果都不一样的,哪是几句话就能搞定的!
19楼2015-09-21 22:31:18
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:28:17
既然你这么专业,拜托你下次回帖的时候显得专业一点,搞得跟个门外汉似的,我当然打抱不平哈
...

您这位牛人不就说别人的第一张图不好吗?
我觉得还可以怎么了?惹到您什么了?哪点不专业了?!
260/280,2.1,图有点弥撒,确实有些降解,但是对多糖多酚植物来说也还不错了。做个qRT-pcr没啥问题。
本身一般的凝胶电泳跑RNA确实是有些降解的,再加上楼主根本没有po出marker,很难说这个RNA质量就很差,完整度测的话必须用安捷伦的凝胶做做。
说了这个RNA还凑合就是门外汉了,您可真牛,po出来让大家看看啊。
20楼2015-09-21 22:36:07
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