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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 跪求铁皮石斛RNA提取方法
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 21:02:52
二楼的貌似没提过RNA，第一张图都那个样子还说提的好，居心何在？
...

10年前提取的RNA，多糖多酚类的植物。那时候手艺差，质量一般，让大牛见笑了。
跪求铁皮石斛RNA提取方法
4.png
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11楼2015-09-21 22:10:38
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:02:44
07年年底做microarray所用的RNA检测，这个是拟南芥的，好提取，质量可好了，呵呵！

3.png
...

拿拟南芥的结果出来，貌似有点搪塞人，拟南芥生长环境极好，杂质也少，随便提都能提的很好，野外的样提过么？

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12楼2015-09-21 22:11:49
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baichi121234

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
13楼2015-09-21 22:15:16
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naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 21:14:21
我这位没提过RNA的给您看看
我提取的紫杉细胞的RNA的凝胶电泳和agilent2100的检测的区别，对了，这个电泳的浓度是稀释10倍的。
您提取的比这个好就拿出来秀秀。

2.png

1.png
...

这个是转录组测序用的，完整度要求达到8.5以上。
一般反转录成cDNA，克隆一两个基因，做几个基因的rt-pcr，楼主那张图的RNA是可以凑合用的。
但是用于race和测序，有降解，完整度堪忧，需要慎重。
从楼主第一张图看，方法还凑合可以，控制好RNA酶活性，提高手艺可以解决完整度。
不知道楼主用了多少材料提取的，浓度偏低。提高浓度从三个方面解决：裂解效率，多糖多酚去除，取嫩的组织。
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14楼2015-09-21 22:19:33
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:11:49
拿拟南芥的结果出来，貌似有点搪塞人，拟南芥生长环境极好，杂质也少，随便提都能提的很好，野外的样提过么？
...

看来您的眼睛真的瞎了，没看到前面的紫杉细胞的RNA么，细胞是褐色的哦！我可不敢忽悠您哦！
就您提过野外的啊？不好意思，我提取的兰花和月季都是野外的。
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15楼2015-09-21 22:23:02
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:23:02
看来您的眼睛真的瞎了，没看到前面的紫杉细胞的RNA么，细胞是褐色的哦！我可不敢忽悠您哦！
就您提过野外的啊？不好意思，我提取的兰花和月季都是野外的。...

人家发帖求助来着，有本事，你帮他搞定得了，叽叽歪歪，得瑟啥

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16楼2015-09-21 22:25:56
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:11:49
拿拟南芥的结果出来，貌似有点搪塞人，拟南芥生长环境极好，杂质也少，随便提都能提的很好，野外的样提过么？
...

主要是让您看看啥叫变性电泳的图，
现在的年轻人都是qRT-pcr了，谁还做northern啊，谁还做变性电泳啊。
张口就说别人没提过，您可真牛！
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17楼2015-09-21 22:26:01
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:26:01
主要是让您看看啥叫变性电泳的图，
现在的年轻人都是qRT-pcr了，谁还做northern啊，谁还做变性电泳啊。
张口就说别人没提过，您可真牛！...

既然你这么专业，拜托你下次回帖的时候显得专业一点，搞得跟个门外汉似的，我当然打抱不平哈

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18楼2015-09-21 22:28:17
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:25:56
人家发帖求助来着，有本事，你帮他搞定得了，叽叽歪歪，得瑟啥
...

我先也只是回复别人的求助啊，不知道哪个眼睛瞎了先嘚瑟的。
我可搞不定，不像您是大牛人，什么都能搞定！
每种植物，每种组织的RNA提取方法都是不一样的，特别是对含多糖多酚的植物来说，需要多种不同方法尝试，摸索，不是那么好搞的。
同样的方法，对同样物种的不同细胞，组织效果都不一样的，哪是几句话就能搞定的！
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19楼2015-09-21 22:31:18
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:28:17
既然你这么专业，拜托你下次回帖的时候显得专业一点，搞得跟个门外汉似的，我当然打抱不平哈
...

您这位牛人不就说别人的第一张图不好吗？
我觉得还可以怎么了？惹到您什么了？哪点不专业了？！
260/280,2.1，图有点弥撒，确实有些降解，但是对多糖多酚植物来说也还不错了。做个qRT-pcr没啥问题。
本身一般的凝胶电泳跑RNA确实是有些降解的，再加上楼主根本没有po出marker，很难说这个RNA质量就很差，完整度测的话必须用安捷伦的凝胶做做。
说了这个RNA还凑合就是门外汉了，您可真牛，po出来让大家看看啊。
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20楼2015-09-21 22:36:07
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