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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

瞧你这样,还不是得瑟,都不知道自己错在哪?他的第一张图,如果换做我,一定是重新提的,绝不会考虑下一步的反转录。且不说完整性如何如何,看都看不清的结果,做下一步基本上没多大意义,所以,你给人的感觉就是没提过RNA。顺便说一下,如果只是RT,建库之类的RNA,只需要跑个琼脂糖胶基本上就能说明问题,点DNA marker,跑变性胶的都貌似有点out了。

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21楼2015-09-21 22:37:58
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jackyoung

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
astwenth: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:45:38
大家都这么讲究,效果都不错,但是到楼主这里就不行了。建议你用最简单的CTAB法试一下,如果不行我再给你个配方,别迷信试剂盒,手制更靠谱。

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CestLaVie
22楼2015-09-21 22:41:41
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:37:58
瞧你这样,还不是得瑟,都不知道自己错在哪?他的第一张图,如果换做我,一定是重新提的,绝不会考虑下一步的反转录。且不说完整性如何如何,看都看不清的结果,做下一步基本上没多大意义,所以,你给人的感觉就是没 ...

纠正一下牛人,变性胶一般只是做northern的时候才去做的,只有您想看RNA质量的时候想去做个变性胶看。
如果是克隆一个已知基因,做一个已知基因的rt,那个RNA可以凑合用了。
和您观点不同就怀疑别人没提取过RNA,有点意思哈!
23楼2015-09-21 22:43:05
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


astwenth: 金币+1 2015-09-23 14:45:51
试剂盒并不能搞定所有的材料,建议可以考虑手提试试,石斛含糖量很高,可以考虑CTAB法。

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24楼2015-09-21 22:43:08
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酒家何处

新虫 (小有名气)

这哥们是厦大的吗?今天好像听公司人说有个厦门的客户要提这个样品。。。

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25楼2015-09-21 22:46:22
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:43:05
纠正一下牛人,变性胶一般只是做northern的时候才去做的,只有您想看RNA质量的时候想去做个变性胶看。
如果是克隆一个已知基因,做一个已知基因的rt,那个RNA可以凑合用了。
和您观点不同就怀疑别人没提取过RNA, ...

你好健忘吧,你说的是第一张图,可以做qRT-PCR,这肯定不合适吧

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26楼2015-09-21 22:46:42
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
astwenth: 金币+1 2015-09-23 14:46:44
比较难提的话。今天农科院一个学生说提花瓣的。糖含量比较高。ctab也提不出来。但是他说自己配的sds的,可以提出来。我也不知道这个sds配方咋配的

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27楼2015-09-21 22:51:04
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:46:42
你好健忘吧,你说的是第一张图,可以做qRT-PCR,这肯定不合适吧
...

qRT-PCR片段只需要100多bp长度的模板左右就行,qRT-pcr的引物是oligo-dt和随机引物的混合物,有些降解并不影响反转录,并且降解基本对所有的RNA是一一致的,个人认为从原理上来看有些降解并不会影响结果。260/280在1.9以上,说明RNA纯度不错,是我的话,我就会用这个RNA做qRT了。
和您观点不同而已。
28楼2015-09-21 22:52:45
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Neo2000

木虫 (著名写手)

引用回帖:
27楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-21 22:51:04
比较难提的话。今天农科院一个学生说提花瓣的。糖含量比较高。ctab也提不出来。但是他说自己配的sds的,可以提出来。我也不知道这个sds配方咋配的

我提过花的,确实不是那么容易,但用CTAB法还是能搞定的,我就是用自己配的buffer,提的时候稍稍注意点就好,花里面的RNA含量不高,采样要适当多一点

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29楼2015-09-21 22:53:51
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naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
28楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:52:45
qRT-PCR片段只需要100多bp长度的模板左右就行,qRT-pcr的引物是oligo-dt和随机引物的混合物,有些降解并不影响反转录,并且降解基本对所有的RNA是一一致的,个人认为从原理上来看有些降解并不会影响结果。260/280在 ...

修改:qRT-pcr的cDNA模板反转录时候的引物是oligo-dt和随机引物的混合物
30楼2015-09-21 22:54:35
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