24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2160  |  回复: 41

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

瞧你这样,还不是得瑟,都不知道自己错在哪?他的第一张图,如果换做我,一定是重新提的,绝不会考虑下一步的反转录。且不说完整性如何如何,看都看不清的结果,做下一步基本上没多大意义,所以,你给人的感觉就是没提过RNA。顺便说一下,如果只是RT,建库之类的RNA,只需要跑个琼脂糖胶基本上就能说明问题,点DNA marker,跑变性胶的都貌似有点out了。

发自小木虫Android客户端
21楼2015-09-21 22:37:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackyoung

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
astwenth: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:45:38
大家都这么讲究,效果都不错,但是到楼主这里就不行了。建议你用最简单的CTAB法试一下,如果不行我再给你个配方,别迷信试剂盒,手制更靠谱。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
22楼2015-09-21 22:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:37:58
瞧你这样,还不是得瑟,都不知道自己错在哪?他的第一张图,如果换做我,一定是重新提的,绝不会考虑下一步的反转录。且不说完整性如何如何,看都看不清的结果,做下一步基本上没多大意义,所以,你给人的感觉就是没 ...

纠正一下牛人,变性胶一般只是做northern的时候才去做的,只有您想看RNA质量的时候想去做个变性胶看。
如果是克隆一个已知基因,做一个已知基因的rt,那个RNA可以凑合用了。
和您观点不同就怀疑别人没提取过RNA,有点意思哈!
23楼2015-09-21 22:43:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


astwenth: 金币+1 2015-09-23 14:45:51
试剂盒并不能搞定所有的材料,建议可以考虑手提试试,石斛含糖量很高,可以考虑CTAB法。

发自小木虫Android客户端
24楼2015-09-21 22:43:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酒家何处

新虫 (小有名气)

这哥们是厦大的吗?今天好像听公司人说有个厦门的客户要提这个样品。。。

发自小木虫Android客户端
25楼2015-09-21 22:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:43:05
纠正一下牛人,变性胶一般只是做northern的时候才去做的,只有您想看RNA质量的时候想去做个变性胶看。
如果是克隆一个已知基因,做一个已知基因的rt,那个RNA可以凑合用了。
和您观点不同就怀疑别人没提取过RNA, ...

你好健忘吧,你说的是第一张图,可以做qRT-PCR,这肯定不合适吧

发自小木虫Android客户端
26楼2015-09-21 22:46:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
astwenth: 金币+1 2015-09-23 14:46:44
比较难提的话。今天农科院一个学生说提花瓣的。糖含量比较高。ctab也提不出来。但是他说自己配的sds的,可以提出来。我也不知道这个sds配方咋配的

发自小木虫Android客户端
27楼2015-09-21 22:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:46:42
你好健忘吧,你说的是第一张图,可以做qRT-PCR,这肯定不合适吧
...

qRT-PCR片段只需要100多bp长度的模板左右就行,qRT-pcr的引物是oligo-dt和随机引物的混合物,有些降解并不影响反转录,并且降解基本对所有的RNA是一一致的,个人认为从原理上来看有些降解并不会影响结果。260/280在1.9以上,说明RNA纯度不错,是我的话,我就会用这个RNA做qRT了。
和您观点不同而已。
28楼2015-09-21 22:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

引用回帖:
27楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-21 22:51:04
比较难提的话。今天农科院一个学生说提花瓣的。糖含量比较高。ctab也提不出来。但是他说自己配的sds的,可以提出来。我也不知道这个sds配方咋配的

我提过花的,确实不是那么容易,但用CTAB法还是能搞定的,我就是用自己配的buffer,提的时候稍稍注意点就好,花里面的RNA含量不高,采样要适当多一点

发自小木虫Android客户端
29楼2015-09-21 22:53:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

naringenin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
28楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:52:45
qRT-PCR片段只需要100多bp长度的模板左右就行,qRT-pcr的引物是oligo-dt和随机引物的混合物,有些降解并不影响反转录,并且降解基本对所有的RNA是一一致的,个人认为从原理上来看有些降解并不会影响结果。260/280在 ...

修改:qRT-pcr的cDNA模板反转录时候的引物是oligo-dt和随机引物的混合物
30楼2015-09-21 22:54:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 astwenth 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +3 王一一依依 2026-03-30 4/200 2026-03-30 09:49 by 王一一依依
[考研] 求化学调剂 +7 wulanna 2026-03-28 7/350 2026-03-30 09:46 by peike
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +11 辰沐5211314 2026-03-26 11/550 2026-03-30 09:00 by 无际的草原
[考研] 337求调剂 +5 《树》 2026-03-29 5/250 2026-03-30 07:38 by Iveryant
[考研] 南京大学化学调剂 +9 景随风 2026-03-29 14/700 2026-03-29 21:22 by chixmc
[考研] 329求调剂,一志愿西北工业大学,材料工程(085601) +4 小小机灵虫 2026-03-29 10/500 2026-03-29 18:20 by 无际的草原
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +7 @taotao 2026-03-29 7/350 2026-03-29 12:03 by longlotian
[考研] 343求调剂 +6 爱羁绊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 12:00 by 无际的草原
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-27 6/300 2026-03-28 14:10 by 唐沐儿
[考研] 317求调剂 +6 十闲wx 2026-03-24 6/300 2026-03-28 13:27 by Iveryant
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 279 分 求调剂 +4 睡个好觉_16 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:05 by 醉在风里
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
信息提示
请填处理意见