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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 跪求铁皮石斛RNA提取方法
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

瞧你这样，还不是得瑟，都不知道自己错在哪？他的第一张图，如果换做我，一定是重新提的，绝不会考虑下一步的反转录。且不说完整性如何如何，看都看不清的结果，做下一步基本上没多大意义，所以，你给人的感觉就是没提过RNA。顺便说一下，如果只是RT，建库之类的RNA，只需要跑个琼脂糖胶基本上就能说明问题，点DNA marker，跑变性胶的都貌似有点out了。

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21楼2015-09-21 22:37:58
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jackyoung

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
astwenth: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:45:38
大家都这么讲究，效果都不错，但是到楼主这里就不行了。建议你用最简单的CTAB法试一下，如果不行我再给你个配方，别迷信试剂盒，手制更靠谱。

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CestLaVie
22楼2015-09-21 22:41:41
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:37:58
瞧你这样，还不是得瑟，都不知道自己错在哪？他的第一张图，如果换做我，一定是重新提的，绝不会考虑下一步的反转录。且不说完整性如何如何，看都看不清的结果，做下一步基本上没多大意义，所以，你给人的感觉就是没 ...

纠正一下牛人，变性胶一般只是做northern的时候才去做的，只有您想看RNA质量的时候想去做个变性胶看。
如果是克隆一个已知基因，做一个已知基因的rt，那个RNA可以凑合用了。
和您观点不同就怀疑别人没提取过RNA，有点意思哈！
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23楼2015-09-21 22:43:05
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
astwenth: 金币+1 2015-09-23 14:45:51
试剂盒并不能搞定所有的材料，建议可以考虑手提试试，石斛含糖量很高，可以考虑CTAB法。

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24楼2015-09-21 22:43:08
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酒家何处

新虫 (小有名气)
这哥们是厦大的吗？今天好像听公司人说有个厦门的客户要提这个样品。。。

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25楼2015-09-21 22:46:22
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:43:05
纠正一下牛人，变性胶一般只是做northern的时候才去做的，只有您想看RNA质量的时候想去做个变性胶看。
如果是克隆一个已知基因，做一个已知基因的rt，那个RNA可以凑合用了。
和您观点不同就怀疑别人没提取过RNA， ...

你好健忘吧，你说的是第一张图，可以做qRT-PCR，这肯定不合适吧

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26楼2015-09-21 22:46:42
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
astwenth: 金币+1 2015-09-23 14:46:44
比较难提的话。今天农科院一个学生说提花瓣的。糖含量比较高。ctab也提不出来。但是他说自己配的sds的，可以提出来。我也不知道这个sds配方咋配的

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27楼2015-09-21 22:51:04
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-21 22:46:42
你好健忘吧，你说的是第一张图，可以做qRT-PCR，这肯定不合适吧
...

qRT-PCR片段只需要100多bp长度的模板左右就行，qRT-pcr的引物是oligo-dt和随机引物的混合物，有些降解并不影响反转录，并且降解基本对所有的RNA是一一致的，个人认为从原理上来看有些降解并不会影响结果。260/280在1.9以上，说明RNA纯度不错，是我的话，我就会用这个RNA做qRT了。
和您观点不同而已。
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28楼2015-09-21 22:52:45
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-21 22:51:04
比较难提的话。今天农科院一个学生说提花瓣的。糖含量比较高。ctab也提不出来。但是他说自己配的sds的，可以提出来。我也不知道这个sds配方咋配的

我提过花的，确实不是那么容易，但用CTAB法还是能搞定的，我就是用自己配的buffer，提的时候稍稍注意点就好，花里面的RNA含量不高，采样要适当多一点

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29楼2015-09-21 22:53:51
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naringenin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 22:52:45
qRT-PCR片段只需要100多bp长度的模板左右就行，qRT-pcr的引物是oligo-dt和随机引物的混合物，有些降解并不影响反转录，并且降解基本对所有的RNA是一一致的，个人认为从原理上来看有些降解并不会影响结果。260/280在 ...

修改：qRT-pcr的cDNA模板反转录时候的引物是oligo-dt和随机引物的混合物
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30楼2015-09-21 22:54:35
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