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astwenth

新虫 (初入文坛)

[求助] 跪求铁皮石斛RNA提取方法 已有6人参与

急急急, 各位大神,小弟最近尝试用过各种方法提过铁皮石斛的RNA,用过TIANGEN公司的多糖多酚试剂盒,天恩泽公司的植物RNAout试剂盒,并且送到3家生物公司去提取过,结果提取效果都不好,有的很模糊,有的直接没有。有提过这种药用植物或者同学提过这种药物的大神吗?有的话麻烦指导一下小弟,不胜感激。上传的有两张最近公司提取得到的RNA图片。跪求铁皮石斛RNA提取方法
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跪求铁皮石斛RNA提取方法-1
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  • 附件 1 : RNA.Tif
  • 2015-09-21 17:56:41, 1.25 M

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naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 21:14:21
我这位没提过RNA的给您看看
我提取的紫杉细胞的RNA的凝胶电泳和agilent2100的检测的区别,对了,这个电泳的浓度是稀释10倍的。
您提取的比这个好就拿出来秀秀。

2.png

1.png
...

这个是转录组测序用的,完整度要求达到8.5以上。
一般反转录成cDNA,克隆一两个基因,做几个基因的rt-pcr,楼主那张图的RNA是可以凑合用的。
但是用于race和测序,有降解,完整度堪忧,需要慎重。
从楼主第一张图看,方法还凑合可以,控制好RNA酶活性,提高手艺可以解决完整度。
不知道楼主用了多少材料提取的,浓度偏低。提高浓度从三个方面解决:裂解效率,多糖多酚去除,取嫩的组织。
14楼2015-09-21 22:19:33
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查看全部 42 个回答

naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
astwenth: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:42:58
提过藏红花,紫杉,雪莲,肉苁蓉,烟草,拟南芥,兰花,月季。
没提过铁皮石斛,不过这植物看上去还好,不应该是很难提取的样子啊,多尝试一些方法吧。
第一张图还可以啊,用来反转录做qrt-pcr是够了。
要是做转录组测序,或者做race的话,好像是有些降解了。
看完整性的话,条件好的话,用agilent2100检测一下就可以了,一般的琼脂糖电泳只能大概的看,不过我不太看好你的第一张图的完整性。
2楼2015-09-21 19:29:44
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by naringenin at 2015-09-21 19:29:44
提过藏红花,紫杉,雪莲,肉苁蓉,烟草,拟南芥,兰花,月季。
没提过铁皮石斛,不过这植物看上去还好,不应该是很难提取的样子啊,多尝试一些方法吧。
第一张图还可以啊,用来反转录做qrt-pcr是够了。
要是做转 ...

二楼的貌似没提过RNA,第一张图都那个样子还说提的好,居心何在?

发自小木虫Android客户端
3楼2015-09-21 21:02:52
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
astwenth: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-23 14:43:43
我提过一些比较难的,愿试试

发自小木虫Android客户端
4楼2015-09-21 21:03:50
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