应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒构建问题，求大神帮忙看看
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 1209  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小白鼠搞科研

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒构建问题，求大神帮忙看看 已有5人参与

本人构建质粒，载体是PGL3-basic,酶切位点Kpn1 ,Xho1,插入片段600bp,普通PCR条带很亮，酶切连接纯化浓度都不低，也适当提高片段浓度，涂板菌落长得很好，菌液PCR有条带很亮，但是一测序用普通PCR引物就没有信号，通用引物显示空载，双酶切检测也显示没有连上，求大神指导下到底哪里出错了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-09-19 12:59:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evangelina

无虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-19 22:08:49
证明菌液PCR出来的都是假阳性，可能是PCR的试剂里面混了目标片段，又或者条件没设好出来非特异条带？
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-19 21:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpuks

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
涂板长得很好很多不能代表确实是连接产物，涂板时做control了吗？没有的话，长得很多有可能是自连呢。还有在连接时载体可以提前做一下去磷酸化处理。“菌落PCR有条带很亮”你做菌P时用的引物是什么引物，不会是在P目的片段时的所用的primer吧，如果真是用的P目的片段时的primer，就是真P出来了，也不能说明确实连接上了，所以建议菌P时用载体上的引物。回收的时候虽然浓度不低，但是最好跑胶看一下到底有没有真回收回来。
赞一下(2人) 回复此楼
开心就好
3楼2015-09-19 22:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renzhiq

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有奖励，不太想参与讨论……

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-09-19 23:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ppppppppp

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
据我看来，估计是xhoi的酶切效率太低了导致的…pcr产物就更难了。长出来自连的都是只切了一刀的…建议增加酶切时间，切五个小时或者过夜。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
初来乍到，请多指教
5楼2015-09-20 00:44:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzhjiangnan

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切效果不好，建议多切一段时间，菌P的引物是不是选的不好，无法区分空载和插入片段？
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-22 18:07:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小白鼠搞科研 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 5/250 2026-03-27 18:42 by 小张zxy张
[考研] 277跪求调剂 +4 1915668 2026-03-27 7/350 2026-03-27 16:03 by 1915668
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 4/200 2026-03-27 13:07 by yhmsz
[考研] 334求调剂 +3 雨清天晴 2026-03-21 3/150 2026-03-27 11:30 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +5 SYA！ 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 一志愿北化求调剂 +3 Jsman 2026-03-22 3/150 2026-03-26 21:06 by ajpv风雷
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +9 稻妻小编 2026-03-26 9/450 2026-03-26 16:16 by 不吃魚的貓
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。，。，。，。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭