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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE电泳条带变弯 & 表达纯化出的单个蛋白呈两条带
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susannawsj

铜虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE电泳条带变弯 & 表达纯化出的单个蛋白呈两条带 已有2人参与

两个问题：
1. 最近跑的蛋白胶条带总是弯的，呈“皱眉”状，这是什么原因？附图（C-cleavage 10倍N & 只有CG的断裂.jpg）
2. 我的蛋白表达并用Ni 纯化后，目标蛋白总是呈现两条的情况，有一条分子量是对的，还有一条在上面，偏大。附图（2）
   ps. 我的质粒以及重组菌都经过验证测序没有问题
这是什么原因？求指教~~

SDS-PAGE电泳条带变弯 & 表达纯化出的单个蛋白呈两条带
C-cleavage 10倍N & 只有CG的断裂.jpg


SDS-PAGE电泳条带变弯 & 表达纯化出的单个蛋白呈两条带-1
2.png
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1楼 2015-09-17 21:09:58
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bugakbug

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.        跑电泳时的电压过高，使样品移动过快。 => 调降电压试试?
2.        若使用的是Bio-Rad系统电泳槽，可能是两片玻璃间的buffer加太少或者是外漏到外槽，使条带变成微笑型。 => 把两片玻璃间的buffer补满与玻璃齐高，外槽也是加满。
3.        2、3楼说的问题，凝胶不均匀或者凝胶的浓度不够。=>凝胶形成的速度太快时，减少TEMED的体积试试；浓度不够的話，提高凝胶浓度。
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4楼2015-09-18 09:37:04
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查看全部 5 个回答

ypslly

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶没压好吧，梳子是不是取早了？配个浓点的胶不知道会不会好点。

发自小木虫Android客户端
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2楼2015-09-17 22:43:22
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Z.Ada

铁虫 (小有名气)
胶不均匀的原因

发自小木虫IOS客户端
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3楼2015-09-17 22:46:23
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susannawsj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bugakbug at 2015-09-18 09:37:04
1.        跑电泳时的电压过高，使样品移动过快。 => 调降电压试试?
2.        若使用的是Bio-Rad系统电泳槽，可能是两片玻璃间的buffer加太少或者是外漏到外槽，使条带变成微笑型。 => 把两片玻璃间的buffer补满与玻璃齐高 ...

谢谢大家的帮助！
问题原因找到了，应该是两块板中间，胶的底部有气泡造成的。之前没注意，这次把气泡除掉就好了。
大家相互借鉴，共同努力！
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5楼2015-09-21 09:54:33
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