24小时热门版块排行榜    

查看: 2659  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

susannawsj

铜虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE电泳条带变弯 & 表达纯化出的单个蛋白呈两条带 已有2人参与

两个问题:
1. 最近跑的蛋白胶条带总是弯的,呈“皱眉”状,这是什么原因?附图(C-cleavage 10倍N & 只有CG的断裂.jpg)
2. 我的蛋白表达并用Ni 纯化后,目标蛋白总是呈现两条的情况,有一条分子量是对的,还有一条在上面,偏大。附图(2)
   ps. 我的质粒以及重组菌都经过验证测序没有问题
这是什么原因?求指教~~

SDS-PAGE电泳条带变弯 & 表达纯化出的单个蛋白呈两条带
C-cleavage 10倍N & 只有CG的断裂.jpg


SDS-PAGE电泳条带变弯 & 表达纯化出的单个蛋白呈两条带-1
2.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bugakbug

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.        跑电泳时的电压过高,使样品移动过快。 => 调降电压试试?
2.        若使用的是Bio-Rad系统电泳槽,可能是两片玻璃间的buffer加太少或者是外漏到外槽,使条带变成微笑型。 => 把两片玻璃间的buffer补满与玻璃齐高,外槽也是加满。
3.        2、3楼说的问题,凝胶不均匀或者凝胶的浓度不够。=>凝胶形成的速度太快时,减少TEMED的体积试试;浓度不够的話,提高凝胶浓度。
4楼2015-09-18 09:37:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

ypslly

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胶没压好吧,梳子是不是取早了?配个浓点的胶不知道会不会好点。

发自小木虫Android客户端
2楼2015-09-17 22:43:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Z.Ada

铁虫 (小有名气)

3楼2015-09-17 22:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susannawsj

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bugakbug at 2015-09-18 09:37:04
1.        跑电泳时的电压过高,使样品移动过快。 => 调降电压试试?
2.        若使用的是Bio-Rad系统电泳槽,可能是两片玻璃间的buffer加太少或者是外漏到外槽,使条带变成微笑型。 => 把两片玻璃间的buffer补满与玻璃齐高 ...

谢谢大家的帮助!
问题原因找到了,应该是两块板中间,胶的底部有气泡造成的。之前没注意,这次把气泡除掉就好了。
大家相互借鉴,共同努力!
5楼2015-09-21 09:54:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +4 a089 2026-08-26 5/250 2026-08-27 09:24 by Howard28
[基金申请] 基金不中,共勉 +7 eulota 2026-08-26 7/350 2026-08-27 09:02 by hsding2026
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 17/850 2026-08-27 08:20 by 大萍1987
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
信息提示
请填处理意见