应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 原核表达相关
111/2返回列表12下一页
查看: 1323  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

[求助] 原核表达相关 已有3人参与

各位大牛，我在做茶树AMP脱氨酶的原核表达，请问：
1. 为了弄清大肠杆菌本身是否含有该酶，我该怎么去做？比如查资料怎么查？
2.如果大肠杆菌含有该酶，测酶活时怎么样做，能确保是原核表达出来的酶，而不是菌本身含有的酶？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-09-15 14:40:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
大家快帮帮我吧
回复此楼
2楼2015-09-15 17:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+2, ★有帮助 2015-10-12 11:20:22
不用这么麻烦啊，你如果是想通过原核蛋白表达纯化得到这个蛋白，给这个蛋白加上标签就可以了啊。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-09-16 09:25:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+4, ★有帮助 2015-10-12 11:21:05
你首先找到你那个酶的基因序列,然后blast一下,分析一下大肠杆菌里面有没有?然后再选择载体,载体上有标签,如28a载体,his标签,纯化出来以后,测酶活就行。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-16 09:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bright8 at 2015-09-16 09:30:00
你首先找到你那个酶的基因序列,然后blast一下,分析一下大肠杆菌里面有没有?然后再选择载体,载体上有标签,如28a载体,his标签,纯化出来以后,测酶活就行。

1.blast后，怎么分析大肠杆菌里面有没有？
2.若大肠杆菌含有该酶， 如何确保酶活不是大肠杆菌里酶的作用？
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-16 10:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-09-16 09:25:04
不用这么麻烦啊，你如果是想通过原核蛋白表达纯化得到这个蛋白，给这个蛋白加上标签就可以了啊。

麻烦再仔细看一下我的问题。。。
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-16 10:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+4, ★有帮助 2015-10-12 11:21:36
引用回帖:
6楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-09-16 10:57:14
麻烦再仔细看一下我的问题。。。...

你的酶表达出来后，是要先纯化出来然后再测酶活的，而不能直接拿细菌或者细菌破碎产物测酶活。所以细菌本身有没有同功能的酶影响都不大，反正你都要先分离你的目的酶。楼上说的加标签是方便你纯化，这个建议很好啊。
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-16 11:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-09-16 10:55:43
1.blast后，怎么分析大肠杆菌里面有没有？
2.若大肠杆菌含有该酶， 如何确保酶活不是大肠杆菌里酶的作用？...

你以前没有做过blast的么？没有了解重组载体的么？建议你先了解这些基本知识!

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-16 11:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liuderong at 2015-09-16 11:29:45
你的酶表达出来后，是要先纯化出来然后再测酶活的，而不能直接拿细菌或者细菌破碎产物测酶活。所以细菌本身有没有同功能的酶影响都不大，反正你都要先分离你的目的酶。楼上说的加标签是方便你纯化，这个建议很好啊 ...

能不能不纯化，超声破碎后然后用液相测酶活？因为这样不就省去纯化的步骤了吗？这样是不是要先搞清大肠杆菌内是否含有该酶？
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-17 15:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-09-17 15:31:41
能不能不纯化，超声破碎后然后用液相测酶活？因为这样不就省去纯化的步骤了吗？这样是不是要先搞清大肠杆菌内是否含有该酶？...

必须要纯化出来才行，不然结果不可信。首先破碎液含细菌总蛋白，一般情况下你随便往里头加一个底物应该都会有反应；其次你没有办法定量总蛋白中目的蛋白的量，假设一个检测体系要加入1U的酶，你无法确定要加多少体积的破碎液，即使你做实验摸索过要加多少，但破碎液里有蛋白酶之类的会造成其他蛋白降解的成分，放置一两天后之前摸索的条件就不成立了；再就是每一次实验得到的破碎液成分都不一样，假设第一次实验破碎液里有A\B\C\D这4种蛋白，含量占总量的25%，那第二次有可能A占30%，B占15%，这种差异使得每次实验收到的干扰都不同。
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-17 16:20:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Deng_Cheng 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +5 yuleib84 2026-08-19 6/300 2026-08-21 08:25 by gltch
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭