应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 原核表达相关
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 1224  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

[求助] 原核表达相关 已有3人参与

各位大牛，我在做茶树AMP脱氨酶的原核表达，请问：
1. 为了弄清大肠杆菌本身是否含有该酶，我该怎么去做？比如查资料怎么查？
2.如果大肠杆菌含有该酶，测酶活时怎么样做，能确保是原核表达出来的酶，而不是菌本身含有的酶？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-09-15 14:40:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
大家快帮帮我吧
回复此楼
2楼2015-09-15 17:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+2, ★有帮助 2015-10-12 11:20:22
不用这么麻烦啊，你如果是想通过原核蛋白表达纯化得到这个蛋白，给这个蛋白加上标签就可以了啊。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-09-16 09:25:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+4, ★有帮助 2015-10-12 11:21:05
你首先找到你那个酶的基因序列,然后blast一下,分析一下大肠杆菌里面有没有?然后再选择载体,载体上有标签,如28a载体,his标签,纯化出来以后,测酶活就行。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-16 09:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bright8 at 2015-09-16 09:30:00
你首先找到你那个酶的基因序列,然后blast一下,分析一下大肠杆菌里面有没有?然后再选择载体,载体上有标签,如28a载体,his标签,纯化出来以后,测酶活就行。

1.blast后，怎么分析大肠杆菌里面有没有？
2.若大肠杆菌含有该酶， 如何确保酶活不是大肠杆菌里酶的作用？
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-16 10:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-09-16 09:25:04
不用这么麻烦啊，你如果是想通过原核蛋白表达纯化得到这个蛋白，给这个蛋白加上标签就可以了啊。

麻烦再仔细看一下我的问题。。。
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-16 10:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+4, ★有帮助 2015-10-12 11:21:36
引用回帖:
6楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-09-16 10:57:14
麻烦再仔细看一下我的问题。。。...

你的酶表达出来后，是要先纯化出来然后再测酶活的，而不能直接拿细菌或者细菌破碎产物测酶活。所以细菌本身有没有同功能的酶影响都不大，反正你都要先分离你的目的酶。楼上说的加标签是方便你纯化，这个建议很好啊。
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-16 11:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-09-16 10:55:43
1.blast后，怎么分析大肠杆菌里面有没有？
2.若大肠杆菌含有该酶， 如何确保酶活不是大肠杆菌里酶的作用？...

你以前没有做过blast的么？没有了解重组载体的么？建议你先了解这些基本知识!

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-16 11:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liuderong at 2015-09-16 11:29:45
你的酶表达出来后，是要先纯化出来然后再测酶活的，而不能直接拿细菌或者细菌破碎产物测酶活。所以细菌本身有没有同功能的酶影响都不大，反正你都要先分离你的目的酶。楼上说的加标签是方便你纯化，这个建议很好啊 ...

能不能不纯化，超声破碎后然后用液相测酶活？因为这样不就省去纯化的步骤了吗？这样是不是要先搞清大肠杆菌内是否含有该酶？
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-17 15:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-09-17 15:31:41
能不能不纯化，超声破碎后然后用液相测酶活？因为这样不就省去纯化的步骤了吗？这样是不是要先搞清大肠杆菌内是否含有该酶？...

必须要纯化出来才行，不然结果不可信。首先破碎液含细菌总蛋白，一般情况下你随便往里头加一个底物应该都会有反应；其次你没有办法定量总蛋白中目的蛋白的量，假设一个检测体系要加入1U的酶，你无法确定要加多少体积的破碎液，即使你做实验摸索过要加多少，但破碎液里有蛋白酶之类的会造成其他蛋白降解的成分，放置一两天后之前摸索的条件就不成立了；再就是每一次实验得到的破碎液成分都不一样，假设第一次实验破碎液里有A\B\C\D这4种蛋白，含量占总量的25%，那第二次有可能A占30%，B占15%，这种差异使得每次实验收到的干扰都不同。
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-17 16:20:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Deng_Cheng 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +6 YYYYYNNNNN 2026-03-26 7/350 2026-03-28 20:52 by 唐沐儿
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +7 Micky11223 2026-03-25 7/350 2026-03-28 18:34 by 无际的草原
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +12 路痴小琪 2026-03-27 12/600 2026-03-28 15:41 by L135790
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 085404求调剂，总分309，本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 279 分 求调剂 +4 睡个好觉_16 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:05 by 醉在风里
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭