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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

[求助] 原核表达相关 已有3人参与

各位大牛,我在做茶树AMP脱氨酶的原核表达,请问:
1. 为了弄清大肠杆菌本身是否含有该酶,我该怎么去做?比如查资料怎么查?
2.如果大肠杆菌含有该酶,测酶活时怎么样做,能确保是原核表达出来的酶,而不是菌本身含有的酶?
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+4, 有帮助 2015-10-12 11:21:36
引用回帖:
6楼: Originally posted by Deng_Cheng at 2015-09-16 10:57:14
麻烦再仔细看一下我的问题。。。...

你的酶表达出来后,是要先纯化出来然后再测酶活的,而不能直接拿细菌或者细菌破碎产物测酶活。所以细菌本身有没有同功能的酶影响都不大,反正你都要先分离你的目的酶。楼上说的加标签是方便你纯化,这个建议很好啊。
7楼2015-09-16 11:29:45
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Deng_Cheng

铁虫 (小有名气)

大家快帮帮我吧
2楼2015-09-15 17:07:31
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+2, 有帮助 2015-10-12 11:20:22
不用这么麻烦啊,你如果是想通过原核蛋白表达纯化得到这个蛋白,给这个蛋白加上标签就可以了啊。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
3楼2015-09-16 09:25:04
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Deng_Cheng: 金币+4, 有帮助 2015-10-12 11:21:05
你首先找到你那个酶的基因序列,然后blast一下,分析一下大肠杆菌里面有没有?然后再选择载体,载体上有标签,如28a载体,his标签,纯化出来以后,测酶活就行。

发自小木虫Android客户端
4楼2015-09-16 09:30:00
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