应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散
111/2返回列表12下一页
查看: 4499  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)

[求助] 新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散 已有4人参与

样品是含有蛋白酶的混合物。
先用12%胶跑了一次，24K左右有清晰条带，同时14.4K下面还有一大团。感觉是有很多小分子没分开
于是改用15%，20%分离胶跑，都弥散了。
泡了几天论坛，又试了一下在20%分离胶里面加尿素（0.15g尿素/5mL分离胶），跑出来，还是弥散的。
求助，要想把那些小分子的分开，有比较清晰的条带，接下来我该怎么办啊？

新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散
12%胶.jpg


新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散-1
20%尿素胶.JPG
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化与检测

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
但我坦然，欣然。我将大笑，我将歌唱！
1楼 2015-09-03 15:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
咖喱牛肉: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-09-04 14:43:59
我觉得你第二块胶是样本降解了，照理说15%就能很好的分开5-20kDa的蛋白，不需要去到20%或者加尿素
你还可以试试在冷冻房跑，温度低蛋白比较不容易分子扩散
关键是小的蛋白本来跑出来就是肥肥的，你要很细很锐的band挺难做到
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-03 19:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-03 19:47:43
我觉得你第二块胶是样本降解了，照理说15%就能很好的分开5-20kDa的蛋白，不需要去到20%或者加尿素
你还可以试试在冷冻房跑，温度低蛋白比较不容易分子扩散
关键是小的蛋白本来跑出来就是肥肥的，你要很细很锐的ba ...

非常感谢！
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道，连条带都没有，都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低，还是降解了？
对于样品降解怎么办，加PMSF可行不？
赞一下 回复此楼
但我坦然，欣然。我将大笑，我将歌唱！
3楼2015-09-04 08:17:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evangelina

无虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 咖喱牛肉 at 2015-09-04 08:17:42
非常感谢！
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道，连条带都没有，都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低，还是降解了？
对于样品降解怎么办，加PMSF可行不？...

你要打质谱的话用银染会比较好，毕竟蛋白小染色也比较弱。
放多一点样品也可以，防止降解也可以加蛋白酶抑制剂，关键是要准备好样品后尽快跑胶
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-04 11:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-04 11:09:02
你要打质谱的话用银染会比较好，毕竟蛋白小染色也比较弱。
放多一点样品也可以，防止降解也可以加蛋白酶抑制剂，关键是要准备好样品后尽快跑胶...

非常感谢！！
回复此楼
但我坦然，欣然。我将大笑，我将歌唱！
5楼2015-09-04 14:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z1211818

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
12%的分离胶是能够把10KDa和15KDa的条带分开的，本人亲测，Marker#26619,可能是你跑的不够久，只要溴酚蓝没有跑出胶，就一直跑啊，尽可能的分开。
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-06 10:59:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by z1211818 at 2015-09-06 10:59:33
12%的分离胶是能够把10KDa和15KDa的条带分开的，本人亲测，Marker#26619,可能是你跑的不够久，只要溴酚蓝没有跑出胶，就一直跑啊，尽可能的分开。

跑的时间应该是够的，每次是把溴酚蓝跑到最底部，快要出去了才停的。条带弥散非常严重。
赞一下 回复此楼
但我坦然，欣然。我将大笑，我将歌唱！
7楼2015-09-06 15:37:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z1211818

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 咖喱牛肉 at 2015-09-06 15:37:18
跑的时间应该是够的，每次是把溴酚蓝跑到最底部，快要出去了才停的。条带弥散非常严重。...

我的也是这样，溴酚蓝周边的条带变得很宽，有时所有上样孔的溴酚蓝会连成一条宽带，但我的Marker显示还是没问题的，10KDa的Marker还是很完整的，就是不清楚有没有周边的其它蛋白扩散，加上我要的是70KDa左右的，所以就没在意这些小分子量的，祝你早日解决问题。
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-08 11:17:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bao可雅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的蛋白电泳缓冲液有问题吗？是不是用了很多次了
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-12 11:04:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WDabc

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 咖喱牛肉 at 2015-09-04 08:17:42
非常感谢！
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道，连条带都没有，都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低，还是降解了？
对于样品降解怎么办，加PMSF可行不？...

做质谱我们都用大胶

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-13 09:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 咖喱牛肉 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 材料与化工328分调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-23 4/200 2026-03-24 11:03 by 544594351
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +6 ￣^￣゜汗 2026-03-19 9/450 2026-03-23 19:53 by pswait
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭