24小时热门版块排行榜    

查看: 4784  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)

[求助] 新手跑SDS-page,蛋白分子量小,条带弥散 已有4人参与

样品是含有蛋白酶的混合物。
先用12%胶跑了一次,24K左右有清晰条带,同时14.4K下面还有一大团。感觉是有很多小分子没分开
于是改用15%,20%分离胶跑,都弥散了。
泡了几天论坛,又试了一下在20%分离胶里面加尿素(0.15g尿素/5mL分离胶),跑出来,还是弥散的。
求助,要想把那些小分子的分开,有比较清晰的条带,接下来我该怎么办啊?

新手跑SDS-page,蛋白分子量小,条带弥散
12%胶.jpg


新手跑SDS-page,蛋白分子量小,条带弥散-1
20%尿素胶.JPG
回复此楼
但我坦然,欣然。我将大笑,我将歌唱!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evangelina

无虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 咖喱牛肉 at 2015-09-04 08:17:42
非常感谢!
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道,连条带都没有,都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低,还是降解了?
对于样品降解怎么办,加PMSF可行不?...

你要打质谱的话用银染会比较好,毕竟蛋白小染色也比较弱。
放多一点样品也可以,防止降解也可以加蛋白酶抑制剂,关键是要准备好样品后尽快跑胶
4楼2015-09-04 11:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
咖喱牛肉: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-09-04 14:43:59
我觉得你第二块胶是样本降解了,照理说15%就能很好的分开5-20kDa的蛋白,不需要去到20%或者加尿素
你还可以试试在冷冻房跑,温度低蛋白比较不容易分子扩散
关键是小的蛋白本来跑出来就是肥肥的,你要很细很锐的band挺难做到
2楼2015-09-03 19:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-03 19:47:43
我觉得你第二块胶是样本降解了,照理说15%就能很好的分开5-20kDa的蛋白,不需要去到20%或者加尿素
你还可以试试在冷冻房跑,温度低蛋白比较不容易分子扩散
关键是小的蛋白本来跑出来就是肥肥的,你要很细很锐的ba ...

非常感谢!
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道,连条带都没有,都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低,还是降解了?
对于样品降解怎么办,加PMSF可行不?
但我坦然,欣然。我将大笑,我将歌唱!
3楼2015-09-04 08:17:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-04 11:09:02
你要打质谱的话用银染会比较好,毕竟蛋白小染色也比较弱。
放多一点样品也可以,防止降解也可以加蛋白酶抑制剂,关键是要准备好样品后尽快跑胶...

非常感谢!!
但我坦然,欣然。我将大笑,我将歌唱!
5楼2015-09-04 14:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 5/250 2026-08-23 12:09 by LR9qGULyN2ew
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见