应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散
51/1返回列表
查看: 4573  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)

[求助] 新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散 已有4人参与

样品是含有蛋白酶的混合物。
先用12%胶跑了一次，24K左右有清晰条带，同时14.4K下面还有一大团。感觉是有很多小分子没分开
于是改用15%，20%分离胶跑，都弥散了。
泡了几天论坛，又试了一下在20%分离胶里面加尿素（0.15g尿素/5mL分离胶），跑出来，还是弥散的。
求助，要想把那些小分子的分开，有比较清晰的条带，接下来我该怎么办啊？

新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散
12%胶.jpg


新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散-1
20%尿素胶.JPG
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化与检测

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
但我坦然，欣然。我将大笑，我将歌唱！
1楼 2015-09-03 15:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WDabc

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 咖喱牛肉 at 2015-09-04 08:17:42
非常感谢！
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道，连条带都没有，都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低，还是降解了？
对于样品降解怎么办，加PMSF可行不？...

做质谱我们都用大胶

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-13 09:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
咖喱牛肉: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-09-04 14:43:59
我觉得你第二块胶是样本降解了，照理说15%就能很好的分开5-20kDa的蛋白，不需要去到20%或者加尿素
你还可以试试在冷冻房跑，温度低蛋白比较不容易分子扩散
关键是小的蛋白本来跑出来就是肥肥的，你要很细很锐的band挺难做到
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-03 19:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-03 19:47:43
我觉得你第二块胶是样本降解了，照理说15%就能很好的分开5-20kDa的蛋白，不需要去到20%或者加尿素
你还可以试试在冷冻房跑，温度低蛋白比较不容易分子扩散
关键是小的蛋白本来跑出来就是肥肥的，你要很细很锐的ba ...

非常感谢！
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道，连条带都没有，都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低，还是降解了？
对于样品降解怎么办，加PMSF可行不？
赞一下 回复此楼
但我坦然，欣然。我将大笑，我将歌唱！
3楼2015-09-04 08:17:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evangelina

无虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 咖喱牛肉 at 2015-09-04 08:17:42
非常感谢！
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道，连条带都没有，都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低，还是降解了？
对于样品降解怎么办，加PMSF可行不？...

你要打质谱的话用银染会比较好，毕竟蛋白小染色也比较弱。
放多一点样品也可以，防止降解也可以加蛋白酶抑制剂，关键是要准备好样品后尽快跑胶
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-04 11:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 260求调剂 +3 Zyt1314520.. 2026-04-17 4/200 2026-04-17 21:06 by Eurekall
[考博] 求博导｜生物质基多孔碳/超级电容方向，已有相关成果，寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[考研] 294求调剂 +7 淡然654321 2026-04-17 8/400 2026-04-17 16:36 by wutongshun
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 25/1250 2026-04-17 15:45 by qzxyhcsy
[考研] 291求调剂 +9 关忆北. 2026-04-14 9/450 2026-04-16 22:49 by cfdbai
[考研] 22专硕求调剂 +10 haoyun上岸 2026-04-11 12/600 2026-04-16 22:21 by 猪会飞
[考研] 22408 312求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-14 25/1250 2026-04-16 21:21 by Art1977
[考研] 307中医考研调剂 +6 于以采蘩 2026-04-14 6/300 2026-04-16 16:20 by qingfeng258
[考研] 327求调剂 +26 Xxjc1107. 2026-04-13 29/1450 2026-04-16 10:52 by Espannnnnol
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 食品与营养（0955）271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭