应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散
51/1返回列表
查看: 4504  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)

[求助] 新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散 已有4人参与

样品是含有蛋白酶的混合物。
先用12%胶跑了一次，24K左右有清晰条带，同时14.4K下面还有一大团。感觉是有很多小分子没分开
于是改用15%，20%分离胶跑，都弥散了。
泡了几天论坛，又试了一下在20%分离胶里面加尿素（0.15g尿素/5mL分离胶），跑出来，还是弥散的。
求助，要想把那些小分子的分开，有比较清晰的条带，接下来我该怎么办啊？

新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散
12%胶.jpg


新手跑SDS-page，蛋白分子量小，条带弥散-1
20%尿素胶.JPG
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化与检测

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
但我坦然，欣然。我将大笑，我将歌唱！
1楼 2015-09-03 15:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bao可雅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的蛋白电泳缓冲液有问题吗？是不是用了很多次了
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-12 11:04:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
咖喱牛肉: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-09-04 14:43:59
我觉得你第二块胶是样本降解了，照理说15%就能很好的分开5-20kDa的蛋白，不需要去到20%或者加尿素
你还可以试试在冷冻房跑，温度低蛋白比较不容易分子扩散
关键是小的蛋白本来跑出来就是肥肥的，你要很细很锐的band挺难做到
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-03 19:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咖喱牛肉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-03 19:47:43
我觉得你第二块胶是样本降解了，照理说15%就能很好的分开5-20kDa的蛋白，不需要去到20%或者加尿素
你还可以试试在冷冻房跑，温度低蛋白比较不容易分子扩散
关键是小的蛋白本来跑出来就是肥肥的，你要很细很锐的ba ...

非常感谢！
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道，连条带都没有，都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低，还是降解了？
对于样品降解怎么办，加PMSF可行不？
赞一下 回复此楼
但我坦然，欣然。我将大笑，我将歌唱！
3楼2015-09-04 08:17:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evangelina

无虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 咖喱牛肉 at 2015-09-04 08:17:42
非常感谢！
我是想切胶去打质谱。第二章图的3,4泳道，连条带都没有，都不知道怎么弄。这是因为我样品量太低，还是降解了？
对于样品降解怎么办，加PMSF可行不？...

你要打质谱的话用银染会比较好，毕竟蛋白小染色也比较弱。
放多一点样品也可以，防止降解也可以加蛋白酶抑制剂，关键是要准备好样品后尽快跑胶
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-04 11:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕，求调剂 6+3 糖葫芦888ll 2026-03-22 8/400 2026-03-25 10:41 by 3Strings
[考研] 284求调剂 +14 Zhao anqi 2026-03-22 14/700 2026-03-25 10:40 by userper
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-23 3/150 2026-03-24 20:25 by 汪！？！
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 材料专硕英一数二306 +8 z1z2z3879 2026-03-18 8/400 2026-03-23 20:49 by baobaoye
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭