应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 对奇异变形杆菌中基因进行敲除
51/1返回列表
查看: 1197  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

周志惠

新虫 (小有名气)

[求助] 对奇异变形杆菌中基因进行敲除 已有2人参与

对奇异变形杆菌中基因进行敲除，最后对克隆进行PCR验证，无论是菌落还是菌液，还是煮沸后的上清，都不能P出条带？求助原因或方法
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-09-02 14:14:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

园园许

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 周志惠 at 2015-09-02 16:00:16
不是，是对将重组质粒电转进去，然后去抗性平板上的菌P不出，并且以一开始的野生型菌为模板，也P不出...

是不是引物出问题了，或者是温度不合适？你做的是菌落PCR，所以所扩增的片段不会太长，你试试用质量较高的模板扩增一下。一般菌落PCR扩增片段超过3k就不容易扩增了。你有没有做重复，PCR仪有时候也存在不稳定性，还有确定PCR体系配制的完整性。
赞一下 回复此楼
高兴是一天，苦恼也是一天，何以？
4楼2015-09-05 16:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对最后够好的重组质粒P不出条带吗？
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-02 15:22:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xrxleisure at 2015-09-02 15:22:56
对最后够好的重组质粒P不出条带吗？

不是，是对将重组质粒电转进去，然后去抗性平板上的菌P不出，并且以一开始的野生型菌为模板，也P不出
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-02 16:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 园园许 at 2015-09-05 16:34:14
是不是引物出问题了，或者是温度不合适？你做的是菌落PCR，所以所扩增的片段不会太长，你试试用质量较高的模板扩增一下。一般菌落PCR扩增片段超过3k就不容易扩增了。你有没有做重复，PCR仪有时候也存在不稳定性，还 ...

之前用提的基因组是能P出来的，用菌液或者菌落做过好几次，都没有P出来
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-06 11:16:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 19:36 by Xc2FxHsHkBNc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:56 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:06 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭