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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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周志惠

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 对奇异变形杆菌中基因进行敲除 已有2人参与

对奇异变形杆菌中基因进行敲除,最后对克隆进行PCR验证,无论是菌落还是菌液,还是煮沸后的上清,都不能P出条带?求助原因或方法
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周志惠

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by xrxleisure at 2015-09-02 15:22:56
对最后够好的重组质粒P不出条带吗?

不是,是对将重组质粒电转进去,然后去抗性平板上的菌P不出,并且以一开始的野生型菌为模板,也P不出
3楼2015-09-02 16:00:16
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xrxleisure

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
对最后够好的重组质粒P不出条带吗?
2楼2015-09-02 15:22:56
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园园许

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
3楼: Originally posted by 周志惠 at 2015-09-02 16:00:16
不是,是对将重组质粒电转进去,然后去抗性平板上的菌P不出,并且以一开始的野生型菌为模板,也P不出...

是不是引物出问题了,或者是温度不合适?你做的是菌落PCR,所以所扩增的片段不会太长,你试试用质量较高的模板扩增一下。一般菌落PCR扩增片段超过3k就不容易扩增了。你有没有做重复,PCR仪有时候也存在不稳定性,还有确定PCR体系配制的完整性。
高兴是一天,苦恼也是一天,何以?
4楼2015-09-05 16:34:14
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周志惠

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
4楼: Originally posted by 园园许 at 2015-09-05 16:34:14
是不是引物出问题了,或者是温度不合适?你做的是菌落PCR,所以所扩增的片段不会太长,你试试用质量较高的模板扩增一下。一般菌落PCR扩增片段超过3k就不容易扩增了。你有没有做重复,PCR仪有时候也存在不稳定性,还 ...

之前用提的基因组是能P出来的,用菌液或者菌落做过好几次,都没有P出来
5楼2015-09-06 11:16:36
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