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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题
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圣诞小喵

新虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题 已有3人参与

不知道那个一开始荧光本底怎么那么高，后面又下降了

实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题
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实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题-1
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1楼 2015-09-02 10:06:17
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
起跳太早，把模板的浓度降低。
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5楼2015-09-02 15:24:47
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许彦

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基线设置的问题，你改到3-8或者5-9试试

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2015-09-02 10:33:34
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helios_hj

至尊木虫 (著名写手)
threshold值默认是3-15 ，可以改为3-12或3-10试试
或者稀释模板，这个情况基本上是由于起始模板拷贝数太高了引起的
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Ifyouthinkyoucan,youcan!!!
3楼2015-09-02 12:36:39
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
起跳太早。一般qPCR：
1）PCR验证引物特异性
2）DNA模板梯度稀释（我们实验室用DNA浓度40ng/ul，倍比稀释7个浓度梯度，即40-0.625ng/ul线性范围。最终选取DNA 浓度2ng/ul，每个孔加5ul样本），看引物扩增效率
3）调整实验体系，如引物浓度，DNA浓度等
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偶时晴天偶时雨
4楼2015-09-02 12:59:05
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