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实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题
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圣诞小喵
新虫
(初入文坛)
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(幼儿园)
金币: 4
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在线: 2.2小时
虫号: 3984264
注册: 2015-07-22
[
求助
]
实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题
已有3人参与
不知道那个一开始荧光本底怎么那么高,后面又下降了
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1楼
2015-09-02 10:06:17
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xiaoyanzi517
铜虫
(小有名气)
应助: 25
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金币: 191.7
红花: 1
帖子: 91
在线: 29.8小时
虫号: 1410739
注册: 2011-09-21
专业: 生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
起跳太早。一般qPCR:
1)PCR验证引物特异性
2)DNA模板梯度稀释(我们实验室用DNA浓度40ng/ul,倍比稀释7个浓度梯度,即40-0.625ng/ul线性范围。最终选取DNA 浓度2ng/ul,每个孔加5ul样本),看引物扩增效率
3)调整实验体系,如引物浓度,DNA浓度等
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偶时晴天偶时雨
4楼
2015-09-02 12:59:05
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许彦
木虫
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(幼儿园)
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红花: 7
帖子: 437
在线: 69小时
虫号: 3925990
注册: 2015-06-15
性别: GG
专业: 生物技术药物
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
基线设置的问题,你改到3-8或者5-9试试
发自小木虫Android客户端
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2楼
2015-09-02 10:33:34
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helios_hj
至尊木虫
(著名写手)
应助: 18
(小学生)
金币: 23549.9
散金: 10
红花: 1
帖子: 2818
在线: 53.6小时
虫号: 3926074
注册: 2015-06-15
性别: GG
专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
threshold值默认是3-15 ,可以改为3-12或3-10试试
或者稀释模板,这个情况基本上是由于起始模板拷贝数太高了引起的
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Ifyouthinkyoucan,youcan!!!
3楼
2015-09-02 12:36:39
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xrxleisure
铜虫
(正式写手)
应助: 29
(小学生)
金币: 747.3
散金: 110
红花: 1
沙发: 1
帖子: 382
在线: 308.5小时
虫号: 3155466
注册: 2014-04-22
专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
起跳太早,把模板的浓度降低。
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5楼
2015-09-02 15:24:47
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13586093586
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售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
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qTvzQBRAHjCi
2026-08-07
5/250
2026-08-08 16:47
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oEVWOejN9taj
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基金申请
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售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
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Vi50GxzrFcSG
2026-08-07
4/200
2026-08-08 16:19
by
oEVWOejN9taj
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]
售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
+3
Vi50GxzrFcSG
2026-08-07
5/250
2026-08-08 15:59
by
oEVWOejN9taj
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博后之家
]
售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
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HEQlVqMTIA7d
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oEVWOejN9taj
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公派出国
]
售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
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HEQlVqMTIA7d
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6/300
2026-08-08 14:39
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oEVWOejN9taj
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售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
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HEQlVqMTIA7d
2026-08-07
5/250
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oEVWOejN9taj
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售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
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oEVWOejN9taj
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教师之家
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售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
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KXLV3nuBVBY7
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