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圣诞小喵

新虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题 已有3人参与

不知道那个一开始荧光本底怎么那么高,后面又下降了

实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题
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实时荧光定量PCR新手~求帮忙分析结果~~不知道自己做的哪里有问题-1
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许彦

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
基线设置的问题,你改到3-8或者5-9试试

发自小木虫Android客户端
2楼2015-09-02 10:33:34
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helios_hj

至尊木虫 (著名写手)

threshold值默认是3-15 ,可以改为3-12或3-10试试
或者稀释模板,这个情况基本上是由于起始模板拷贝数太高了引起的
Ifyouthinkyoucan,youcan!!!
3楼2015-09-02 12:36:39
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
起跳太早。一般qPCR:
1)PCR验证引物特异性
2)DNA模板梯度稀释(我们实验室用DNA浓度40ng/ul,倍比稀释7个浓度梯度,即40-0.625ng/ul线性范围。最终选取DNA 浓度2ng/ul,每个孔加5ul样本),看引物扩增效率
3)调整实验体系,如引物浓度,DNA浓度等
偶时晴天偶时雨
4楼2015-09-02 12:59:05
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
起跳太早,把模板的浓度降低。
5楼2015-09-02 15:24:47
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