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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 如何对丝状真菌（如灰葡萄孢）细胞器进行GFP、RFP双标记？？~~~~~~~~~~~
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propamidine

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 如何对丝状真菌（如灰葡萄孢）细胞器进行GFP、RFP双标记？？~~~~~~~~~~~ 已有1人参与

如题：如何对丝状真菌（如灰葡萄孢）细胞器进行GFP、RFP双标记？
      本人对分子生物学、基因工程是门外汉。
      因课题需要，现欲对丝状真菌（如灰葡萄孢）进行GFP、RFP双标记，分别标记细胞核、线粒体。
      最终目的是在激光共聚焦显微镜下直接观察细胞核、线粒体的亚细胞定位。
      不知道如何进行....包括：
     1、基本流程是什么？
     2、序列如何选择？
     3、载体如何选择和构建？
     4、用酵母还是农杆菌转化？如何转化？
     等等问题....因为不懂，都不知道该问些什么
     希望虫友能帮助，指点迷津。
     提前感谢虫友的帮助！！谢谢！！！！
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1楼 2015-08-31 16:45:12
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
propamidine: 金币+20, ★★★很有帮助, 你好，具体的protocol（傻瓜式的。。。）或者文献能推荐吗？我也找不到类似的中文论文或文献。 2015-08-31 22:30:38
首先，你需要合适的载体系统，真菌必须对筛选标记敏感，你想进行双标记，可以考虑同时转化两个载体进去或者分两次转，丝状真菌的转化可以考虑走原生质体途径或者借助农杆菌

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-08-31 18:47:11
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qilinhuang

新虫 (初入文坛)
楼主有没有做成功啦？我最近也要做，没有头绪呢，希望您能指点指点啊！拜托拜托！
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3楼2016-09-06 10:11:27
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花落已季末

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-08-31 18:47:11
首先，你需要合适的载体系统，真菌必须对筛选标记敏感，你想进行双标记，可以考虑同时转化两个载体进去或者分两次转，丝状真菌的转化可以考虑走原生质体途径或者借助农杆菌
...

你好，我在做真菌转化，原生质体和农杆菌都尝试过，但一直没有成功，可否分享一下这方面的经验？
赞一下 回复此楼
流年似水，看不透的是红尘中镜花水月；往事如烟，挥不去的是岁月荏苒一过往；待得繁华落尽，只余回忆。
4楼2016-11-14 10:48:54
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