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propamidine

铁杆木虫 (著名写手)


[求助] 如何对丝状真菌(如灰葡萄孢)细胞器进行GFP、RFP双标记??~~~~~~~~~~~ 已有1人参与

如题:如何对丝状真菌(如灰葡萄孢)细胞器进行GFP、RFP双标记?
      本人对分子生物学、基因工程是门外汉。
      因课题需要,现欲对丝状真菌(如灰葡萄孢)进行GFP、RFP双标记,分别标记细胞核、线粒体。
      最终目的是在激光共聚焦显微镜下直接观察细胞核、线粒体的亚细胞定位。
      不知道如何进行....包括:
     1、基本流程是什么?
     2、序列如何选择?
     3、载体如何选择和构建?
     4、用酵母还是农杆菌转化?如何转化?
     等等问题....因为不懂,都不知道该问些什么
     希望虫友能帮助,指点迷津。
     提前感谢虫友的帮助!!谢谢!!!!
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
propamidine: 金币+20, ★★★很有帮助, 你好,具体的protocol(傻瓜式的。。。)或者文献能推荐吗?我也找不到类似的中文论文或文献。 2015-08-31 22:30:38
首先,你需要合适的载体系统,真菌必须对筛选标记敏感,你想进行双标记,可以考虑同时转化两个载体进去或者分两次转,丝状真菌的转化可以考虑走原生质体途径或者借助农杆菌

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-31 18:47:11
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qilinhuang

新虫 (初入文坛)

楼主有没有做成功啦?我最近也要做,没有头绪呢,希望您能指点指点啊!拜托拜托!
3楼2016-09-06 10:11:27
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花落已季末

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-08-31 18:47:11
首先,你需要合适的载体系统,真菌必须对筛选标记敏感,你想进行双标记,可以考虑同时转化两个载体进去或者分两次转,丝状真菌的转化可以考虑走原生质体途径或者借助农杆菌
...

你好,我在做真菌转化,原生质体和农杆菌都尝试过,但一直没有成功,可否分享一下这方面的经验?
流年似水,看不透的是红尘中镜花水月;往事如烟,挥不去的是岁月荏苒一过往;待得繁华落尽,只余回忆。
4楼2016-11-14 10:48:54
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