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red同源重组做敲除时 电入片段后pcr无条带？？
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如题，在大肠JM109中用red同源重组做敲除时，电入扩增好的片段，然后PCR验证是否敲除成功。照理说无论是否敲除成功，都该有条带的（若成功，该是1500bp;不成功，该是基因大小）。可我的PCR结果是阳性对照（肯定含该基因的菌）都有基因大小的条带，做了电击的都没有条带。。。然后我提基因组验证，有的敲除成功，可是抗性一直消不掉。 有以下问题：我的pcr是用95度10min预变性，95度30s变性。而且阳性对照都出了很好的条带，为甚么做了电击的菌做菌落pcr就没东西出来？而提了基因组又能有条带的？为啥后面消抗老不长？？ |
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