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red同源重组做敲除时 电入片段后pcr无条带??
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如题,在大肠JM109中用red同源重组做敲除时,电入扩增好的片段,然后PCR验证是否敲除成功。照理说无论是否敲除成功,都该有条带的(若成功,该是1500bp;不成功,该是基因大小)。可我的PCR结果是阳性对照(肯定含该基因的菌)都有基因大小的条带,做了电击的都没有条带。。。然后我提基因组验证,有的敲除成功,可是抗性一直消不掉。 有以下问题:我的pcr是用95度10min预变性,95度30s变性。而且阳性对照都出了很好的条带,为甚么做了电击的菌做菌落pcr就没东西出来?而提了基因组又能有条带的?为啥后面消抗老不长?? |
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