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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » red同源重组做敲除时 电入片段后pcr无条带？？
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淘七九懒

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] red同源重组做敲除时 电入片段后pcr无条带？？

如题，在大肠JM109中用red同源重组做敲除时，电入扩增好的片段，然后PCR验证是否敲除成功。照理说无论是否敲除成功，都该有条带的（若成功，该是1500bp;不成功，该是基因大小）。可我的PCR结果是阳性对照（肯定含该基因的菌）都有基因大小的条带，做了电击的都没有条带。。。然后我提基因组验证，有的敲除成功，可是抗性一直消不掉。
有以下问题：我的pcr是用95度10min预变性，95度30s变性。而且阳性对照都出了很好的条带，为甚么做了电击的菌做菌落pcr就没东西出来？而提了基因组又能有条带的？为啥后面消抗老不长？？
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1楼 2015-08-31 15:37:20
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cyl-1

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是否是片段里含有pkd3质粒，污染有杂菌
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25楼2015-12-15 17:14:43
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dmbb2楼
2015-08-31 15:57   回复  
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211001123楼
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lirongj4楼
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hydzp5楼
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zhangzhiguang6楼
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kiss2008553720楼
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nono200921楼
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zhchzhsh207623楼
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yudit24楼
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