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提质粒跑胶 已有4人参与
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| 提出的质粒跑胶结果要怎么分析，要怎么和Marker比较来判断是否其是否正确？谢谢！ |
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6楼2015-08-26 10:32:49
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【答案】应助回帖
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新的自我100: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-08-26 14:57:54
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一般情况下，我常做的时候是，忽略环状和线状DNA迁移率的差异，即环状DNA的大小即为线状DNA的大小，所以电泳时的大小即可认为是正确的。但是验证重组质粒时，用电泳跑完整的质粒，以及用特异性引物p出的条带，以及使用单酶切，双酶切等的产物进行电泳验证时，都是主观判断条带大小，无法100%确认是否正确，比如，你插入的目的片段为1K，但是由于某种未知原因重组时有可能会缺失或增加几bp或10几bp（我只说是可能性，并不一定真的是这几个碱基大小）。这种情况下，你跑普通电泳的话基本是判断不出来两者之间的差别的，所以想要100%确认重组质粒是否正确，电泳初步判断后还是要进行测序验证后，才能进行下面的实验的。 |
10楼2015-08-26 12:47:51
Huobol
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
新的自我100: 金币+1, ★有帮助 2015-08-26 14:58:45
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新的自我100: 金币+1, ★有帮助 2015-08-26 14:58:45
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插入目的片段后的重组质粒的大小是可以算的，比如2692 bp的pMD19-T载体，其重组质粒大小就等于2692加插入的目的片段的大小，这样质粒电泳后参照Marker就知道重组质粒条带的大致位置了。最后还是要测序验证。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2015-08-26 01:52:35
3楼2015-08-26 09:24:07
a86052
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4楼2015-08-26 09:36:08
5楼2015-08-26 10:23:31
7楼2015-08-26 10:35:32
环状质粒电泳会与Maker有一定的差别的。下面是我最近做真核表达时候跑pPICZαA质粒，仅供参考。希望可以多多交流！
8楼2015-08-26 11:04:29
9楼2015-08-26 11:28:11
