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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助，想直接换掉构建好的载体上的目的基因，听说有一种融合的技术，不需酶切？
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erin090506

新虫 (小有名气)

[求助] 求助，想直接换掉构建好的载体上的目的基因，听说有一种融合的技术，不需酶切？ 已有2人参与

求助大家，我手里有一个构建好的载体，想直接换掉目的基因，但是测序后发现基因前后片段很小，没有酶切位点。
是不是有一种通过PCR，融合技术换掉载体上目的基因的方法，应该怎么操作，有没有相关的文献推荐。谢谢！
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实实在在做科研
1楼 2015-08-24 11:20:39
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
erin090506: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-25 10:27:20
你又没提前设置gateway位点，老老实实酶切连接吧，那个快

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2楼2015-08-24 12:03:24
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
erin090506: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2015-08-25 10:27:42
无缝克隆，现在国产的很多。
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3楼2015-08-24 22:44:20
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erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-08-24 12:03:24
你又没提前设置gateway位点，老老实实酶切连接吧，那个快

又一次涨知识了。都没有听说过gateway位点。谢谢这位大侠
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实实在在做科研
4楼2015-08-25 10:29:12
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mao081312

铁虫 (小有名气)
无缝克隆也需要切开载体的，如果你载体上没有酶切位点，就只有重来了
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5楼2015-08-28 12:30:18
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那雨那女孩

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mao081312 at 2015-08-28 12:30:18
无缝克隆也需要切开载体的，如果你载体上没有酶切位点，就只有重来了

大神！求帮忙！！！我载体上有酶切位点，但载体有5Kb,目的基因有1Kb,无缝连接能连接起来吗？？？？

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辟邪
6楼2016-01-17 23:32:42
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mao081312

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 那雨那女孩 at 2016-01-17 23:32:42
大神！求帮忙！！！我载体上有酶切位点，但载体有5Kb,目的基因有1Kb,无缝连接能连接起来吗？？？？
...

可以的，这种比例很常见的

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7楼2016-01-17 23:53:25
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那雨那女孩

新虫 (小有名气)
啊，太谢谢了！！！我还有不懂的地方，就是，我的载体是用酶切的，粘性末端只有6个，但是，设计引物的时候，要与载体重复15bp左右，还有9个左右的碱基是多出来的，我就想问，无缝连接是沿载体复制一圈呢，还是只复制目的基因部分，然后与线性载体相连？

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辟邪
8楼2016-01-18 00:04:16
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那雨那女孩

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mao081312 at 2016-01-17 23:53:25
可以的，这种比例很常见的
...

太谢谢了！！！我还有不懂的地方，就是，我的载体是用酶切的，粘性末端只有6个，但是，设计引物的时候，要与载体重复15bp左右，还有9个左右的碱基是多出来的，我就想问，无缝连接是沿载体复制一圈呢，还是只复制目的基因部分，然后与线性载体相连？

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辟邪
9楼2016-01-18 01:12:39
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